[发明专利]诺如病毒P粒子基因PGENE及表达诺如病毒P粒子的方法

权利要求书

1.一种诺如病毒P粒子的PGENE基因，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种质粒载体，其特征在于，该载体包括SEQ ID NO.1所示的碱基序列。

3.一种在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，该方法包括以下步骤：

步骤一、合成PGENE基因，并将其连入pUC57质粒中形成质粒载体pUC57-PGENE，用Hind III和BamH I对所述质粒载体pUC57-PGENE进行双酶切，同时用BamH I和Hind III对质粒pET32a进行酶切，利用胶回收试剂盒分别回收所述pUC57-PGENE酶切产物的小片段DNA分子和所述质粒pET32a酶切产物的大片段DNA分子，用T4连接酶连接所述小片段DNA分子和所述大片段DNA分子，获得重组质粒pET32-PGENE；

步骤二、将所述重组质粒转化大肠杆菌DH5α，并在LB液体培养基中培养所述大肠杆菌DH5α，然后取该菌体在加有氨苄抗生素的LB固体培养基上图板，筛选单菌落；

步骤三、将所述单菌落摇菌培养扩增，并抽提其质粒pET32-PGENE，并将该质粒用冻融法导入大肠杆菌BL21中，获得包含目的基因表达载体的大肠杆菌BL21工程菌；

步骤四、将所述工程菌在LB液体培养基中先37℃过夜培养，再接着继代培养；

步骤五、取所述继代培养后的菌液进行OD值测定，当其OD值达到0.6-0.8时，用IPTG进行诱导，所述工程菌即可表达产生诺如病毒P粒子。

4.根据权利要求3所述的在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，其特征在于，在所述步骤一中，所述T4连接酶连接的具体条件为16℃下连接过夜。

5.根据权利要求3所述的在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，其特征在于，在所述步骤二中，在所述LB液体培养基中培养所述大肠杆菌DH5α的时间为3-5小时。

6.根据权利要求3所述的在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，其特征在于，在所述步骤五中，用IPTG进行诱导的条件为：1M的IPTG在37℃条件下进行诱导培养4.5小时。

7.根据权利要求3所述的在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，其特征在于，该方法还包括pET32-PGENE活性蛋白的提取，所述提取包括以下步骤：取经IPTG诱导表达后的菌液，4℃条件下8000rmp离心，收集菌落；向所述收集的菌落中加入PBS，超声波破碎细胞；利用NI柱对目的蛋白进行纯化，收集目的蛋白。

8.根据权利要求7所述的在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，其特征在于，所述超声波破碎的条件为：功率200W，超声10s，间隔10s，6个循环。

9.根据权利要求3至8任一项所述的在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，其特征在于，所述LB液体培养基的组分以及各组分的重量体积百分比为：胰化蛋白胨1％，酵母提取物0.5％，NaCl 1％，羧苄抗生素30μg/mL；所述LB液体培养基的pH值为7.0，所述LB液体培养基经高温高压灭菌25min。

10.根据权利要求3至8任一项所述的在大肠杆菌中表达诺如病毒P粒子的方法，其特征在于，所述LB固体培养基的组分以及各组分的重量体积百分比为：胰化蛋白胨1％，酵母提取物0.5％，NaCl 1％，羧苄抗生素30μg/mL，琼脂1.5％；所述LB固体培养基的pH值为7.0，所述LB固体培养基经高温高压灭菌25min。