[发明专利]杂交瘤细胞株1C8及其产生的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及杂交瘤细胞株1C8及其产生的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体。 

背景技术

黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。黄曲霉毒素目前已发现20余种，主要包括黄曲霉毒素B1（AFB1）、B2（AFB2）、AFG和 M1（AFM1）等。其中AFB1的毒性最强，它的毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，AFG的毒性次之，这些毒素具有很强的致癌性，其中：AFG在我国胃癌、食管癌高发区居民饮食中的检出率很高。为此，世界各国都在食品安全领域限定了AFG在食品等中的含量。我国属于黄曲霉毒素污染较重的地区，因此加强农产品中黄曲霉毒素G的检测、特别是速测，及时了解和掌握农产品的卫生信息，对保障我国食品消费安全具有重要意义。 

现有黄曲霉毒素的检测方法包括薄层层析法、精密仪器分析法和免疫学分析法。其中薄层层析法是较早用于检测黄曲霉毒素最常用的检测方法，该法不需要特殊的仪器设备，一般实验室都可进行，但试剂用量大、操作繁琐、其它组分干扰严重、准确性差，不能准确定量，且对实验人员和周围环境污染危害较大，不适于现场快速检测。精密仪器分析法主要包括荧光分光光度法和高效液相色谱法，这些方法灵敏度高，准确性好，但又有仪器昂贵，要求黄曲霉毒素样品纯化程度高，样品前处理过程繁琐，耗时长，对实验环境要求高等不足，难以实现快速检测。免疫分析技术克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和周围环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点，已应用于食品、医疗等多个领域。免疫分析是利用抗原和抗体的特异性的结合反应和抗体、抗原上的标记物的生物、物理或化学放大作用来对超微量残留物进行定性、定量检测，而抗体的特异性、灵敏度等直接影响检测结果，所以要研究建立针对黄曲霉毒素G1的免疫学检测技术，必须先制得高质量的抗黄曲霉毒素G1抗体。 

发明内容

本发明所要解决的问题是提供杂交瘤细胞株1C8及其产生的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体。 

本发明提供了杂交瘤细胞株1C8，该细胞株已于2010年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO. C201017，分类命名为小鼠杂交瘤细胞1C8。其具有序列表中SEQ ID NO.1所示的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体轻链可变区编码基因序列和序列表中SEQ ID NO.2所示的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体重链可变区编码基因序列。 

抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体，它由保藏编号为CCTCC C201017的杂交瘤细胞株1C8分泌产生。其轻链可变区具有序列表中SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；重链可变区具有序列表中SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。该抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体可以识别黄曲霉毒素G1，对黄曲霉毒素G1的50%抑制浓度IC₅₀ 为13.92 ng/mL。 

抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体在黄曲霉毒素G1测定中的应用。 

本发明提供的杂交瘤细胞株1C8是采用两步筛选法获得的，其具体步骤为：将BALB/c小鼠经黄曲霉毒素完全抗原AFG1-BSA（见CN101270146.X公开的AFG1-BSA完全抗原）免疫4-6次后，用2倍于第一次免疫剂量的黄曲霉毒素完全抗原AFG1-BSA作最后一次加强免疫，3天后进行细胞融合，采用ELISA方法分两步进行融合细胞筛选：第一步采用间接ELISA法筛选出抗黄曲霉毒素而不抗载体蛋白BSA的阳性孔；第二步采用间接竞争ELISA法对第一步筛选出的阳性克隆培养液进行检测，用黄曲霉毒素G1作为竞争原，选择吸光值和灵敏度均较高的孔，采用有限稀释法进行克隆，克隆后10天左右采用同样的两步筛选法进行检测，如此重复克隆2-3次后，最终筛选获得杂交瘤细胞株1C8。 

本发明提供的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体的制备方法，步骤如下：将获得的杂交瘤细胞株1C8注射预先用福氏不完全佐剂处理过的BALB/c小鼠，收集该小鼠的腹水，纯化即得抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体。