[发明专利]用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物、其制备方法及黄曲霉毒素ELISA检测方法

说明书

技术领域

本发明属黄曲霉毒素检测领域，具体涉及用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物、其制备方法及黄曲霉毒素ELISA检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌（Aspergillus flavs）、寄生曲霉菌（Aspergillus parasiticus）和集蜂曲霉菌（Aspergillus nonius）产生的一组高毒和强致癌的次生代谢产物，主要有黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B₁，AFB₁），黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M₁，AFM₁），黄曲霉毒素G1（Aflatoxin G₁，AFG₁）。其广泛存在于各种农产品、食品和饲料中，严重污染花生、稻米、玉米、小麦等粮油产品，极大威胁人民的身体健康和生命安全。由于黄曲霉毒素对人类的潜在威胁日趋严重，世界上已有100多个国家对农产品食品中黄曲霉毒素的含量进行了严格的限量要求。因此迫切需要操作简单、快速、高通量的检测技术对污染物进行监控、检测。免疫学检测技术具有灵敏度高、样品前处理简单、操作方便的特点。其中酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）具有检测通量高、样品需要量少的优点，已广泛应用于食品及农产品中黄曲霉毒素的检测。由于ELISA法定量时需要竞争反应和标准曲线，检测过程中需应用大量黄曲霉毒素标准品进行质控，且检测不同的黄曲霉毒素需要不同的黄曲霉毒素标准品。并且，这些高毒强致癌物质的使用会对操作人员和环境带来极大的危害，且因价格昂贵、供应紧张，经常影响检测过程的进行。因此急需一种安全、低成本的ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物会大大降低检测过程的风险，简化检测步骤。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物、其制备方法及黄曲霉毒素ELISA检测方法。该标准品通用替代物无毒无害，可分别通过替代黄曲霉毒素ELISA检测方法中的各相应黄曲霉毒素标准品来定量检测样品中各相应黄曲霉毒素浓度。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物，其特征在于：它为可识别各鼠源抗黄曲霉毒素单克隆抗体的兔抗鼠抗体。

按上述方案，所述抗黄曲霉毒素单克隆抗体优选为抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体、抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体。

用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物的制备方法，其特征在于：它是以鼠源抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体、抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体作为混合抗原，经免疫新西兰长耳大白兔，颈动脉取血，血清亲和纯化后获得的。

按上述方案，所述的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO. C201014    的杂交瘤细胞株3G1分泌产生的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体3G1；所述的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO. C201018的杂交瘤细胞株2C9分泌产生的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体2C9，所述的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体1C8为由保藏编号为CCTCC NO. C201017的杂交瘤细胞株1C8分泌产生的抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体1C8；所述抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体3G1，抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体2C9和抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体1C8为等摩尔量配比作混合抗原。

用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物在黄曲霉毒素ELISA检测中的应用。

黄曲霉毒素ELISA检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（1）采用常规间接竞争ELISA方法，将标准品通用替代物取代各黄曲霉毒素标准品，分别建立各相应黄曲霉毒素标准品通用替代物ELISA标准分析曲线方程a（x₁，y₁），

——x₁为各相应黄曲霉毒素标准品通用替代物的浓度，y₁为抑制率；

（2）采用常规间接竞争ELISA方法，测定待测样品的抑制率；