[发明专利]基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法

说明书

[技术领域]

本发明涉及一种医药试剂，具体的说是一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法。

[背景技术]

免疫检测技术是指通过抗原与抗体特异性反应，建立的各种检测与分析的技术。目前的免疫检测技术主要包括酶联免疫、胶体金、免疫荧光和化学发光等技术。而这些技术原理都大致相同，都是把抗原、抗体固定到固相载体，然后通过抗原与抗体的特异性结合发生反应，最后通过放大系统把这种抗原与抗体的反应放大，转化为可接收的信号，以实现对目标物质的检测及分析。

目前国内用的较多的固相载体主要还是酶标板，而国外多用乳胶微球或磁性微球取而代之。乳胶微球相对酶标板有很多优势，这种微球的粒径多为纳米级及微米级微球，它相对于板大大提高了固相载体与抗原抗体交联的表面积，使抗原抗体的交联率大大提高。它的密度与缓冲液的密度几乎一致，这样使这些乳胶微球能够均匀的分布在溶液中，在抗原与抗体特异性反应时，不再像板一样是一种单向反应，而是抗原与抗体的双向反应，大大提高了反应的速度。但乳胶微球的粒径太小，这给抗原抗体特异性反应后的清洗带来了麻烦，往往需要比较昂贵的清洗仪器，如高速冷冻离心机。基于此，磁性微球也就得到了大家的青睐，它即有乳胶微球带来的优势，又弥补了乳胶微球的不足之处。国外很多诊断试剂公司主要用到的磁珠粒径在500nm-2.0um之间，而本发明用到的大粒径磁珠的粒径分布在0.5mm-3.0mm之间，结合我们的仪器，使清洗效力及速度大大提升，抗原抗体反应时间大大降低，只要数分钟就能完成一个检测。

[发明内容]

本发明为了克服现有技术的不足，一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法。

为了实现上述目的，本发明设计了一种基于大粒径磁珠的抗原抗体包被方法，其特征在于，采用如下步骤：

A、称取一定量的大粒径磁珠，置于锥形瓶内，并加入缓冲液，缓冲液的PH值为4.0-10.0；

B、再加入需要包被的抗原或抗体，置于温控摇床内，4-37℃反应3-16h；

C、反应后，取出锥形瓶，用清洗液清洗数次，然后加入封闭液，置于温控摇床内，4-37℃反应1-16h；

D、反应后取出2-8℃保存待用。

所述步骤A中，缓冲液包括如下物质：NaCl，8.0g；KCl，0.2g；Na₂HPO₄.12H₂O，2.9g；KH₂PO₄，0.2g；加DDW定容至1000mL。

所述步骤A中，缓冲液包括如下物质：Na₂CO₃，1.59g；NaHCO₃，2.93g；加DDW定容至1000mL。

所述步骤C中，清洗液包括如下物质：NaCl，8.0g；KCl，0.2g；Na₂HPO₄.12H₂O，2.9g；KH₂PO₄，0.2g；Tween-20，0.5mL；加DDW定容至1000mL。

所述步骤C中，封闭液包括如下物质：NaCl，8.0g；KCl，0.2g；Na₂HPO₄.12H₂O，2.9g；KH₂PO₄，0.2g；BSA，30.0g；甘露醇，10.0g；甘氨酸，20.0 g；Tween-20或Triton X-100，0.5 mL；NaN3，0.90g；加DDW定容至1000mL。

所述步骤C中，封闭液包括如下物质：NaCl，8.0g；KCl，0.2g；Na₂HPO₄.12H₂O，2.9g；KH₂PO₄，0.2g；酪蛋白，20.0g；BSA，10.0g；海藻糖，10.0g；Triton X-100，0.5mL；NaN3，0.90 g；加DDW定容至1000mL。

所述步骤A中，大粒径磁珠的粒径范围为0.5mm-3.0mm。

本发明同现有技术相比，具有以下特点：

1、分离速度快，只需要数秒钟即可达到固相与液相分离的效果。

2、就能够使包被了抗原抗体的磁珠在反应杯振荡，使抗原抗体之间的反应更充分，大大缩短抗原抗体的反应时间。

3、清洗方便、分离完全，大大简化了仪器在清洗装置的自动化设计。