[发明专利]一种从垂盆草中提取纯化垂盆草苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取分离技术领域，涉及一种从垂盆草中提取纯化垂盆草苷的方法。

背景技术

垂盆草(Sedum sarmentosumBunge)为景天科(Crassulaceae)景天属(Sedum)多年生肉质草本植物，是中国药典记载的常用中药之一，其味甘、淡，微酸、凉，入肝、胆、心、小肠等四经，具有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效，主治丹毒溃疡、小便不利及急慢性肝炎等症。化学研究表明，垂盆草主要含有蛋白质、氨基酸、糖类、黄酮类、三萜类等物质。1979年方圣鼎等从水溶性部位分离到一种氰苷类成分：2-氰基-4-O-β-D-葡萄糖反丁烯-2-醇，命名为垂盆草苷(sarmentosin)，并指出其为抗肝炎活性成分，能迅速降低患者的血清谷丙转氨酶（SGPT）水平；此外研究表明垂盆草苷对机体的细胞免疫反应有显著的抑制作用，通过降低大鼠胸腺细胞数，使骨髓中T细胞比例显著增高，抑制T细胞介导的SRBC的抗体形成数，提高外周血中白细胞数和中性细胞比例。

垂盆草苷，无色透明胶状物，味苦，100℃以上分解；分子式：C₁₁H₁₇NO₇；分子量：275.26。

现有技术多是采用含醇液回流提取，硅胶柱分离，溶剂消耗量大，生产周期长，药用有效成分利用率低，无法产业化；垂盆草苷性质不稳定，100℃以上易分解，不适合回流提取。中国专利申请号201010511372.2公开了一种垂盆草苷的制备方法，该方法采用新鲜垂盆草，加水浸泡，压榨并滤过，滤液加入活性炭脱色，滤过，取滤液，通过大孔吸附树脂柱吸附，10-30%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩干燥，加入甲醇溶解，滤过，取滤液，加入到硅胶柱层析柱上，以比例为1:1的甲醇-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，合并洗脱液，减压浓缩并低温干燥，得到垂盆草苷，该方法得率低，仅为0.05%-0.076%。

发明内容

本发明的目的在提供一种从垂盆草中提取纯化垂盆草苷的方法，以得到高纯度的垂盆草苷。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种从垂盆草中提取纯化垂盆草苷的方法，其特征在于包括以下步骤：将垂盆草烘干、粉碎，置于超临界萃取釜中脱脂1~3h，脱脂物用含醇液恒温浸渍提取，再通过膜分离系统超滤，透过液上大孔树脂柱吸附，20-35%乙醇溶液洗脱，洗脱流速为2-5BV/h，收集洗脱液，减压浓缩干燥得垂盆草苷粗提物，最后经制备液相纯化的方法获得纯度98%以上的垂盆草苷产品。

所述超临界脱脂条件为：温度为25-45℃，压力为20-28MPa。

所述含醇液为10~35%乙醇或甲醇溶液。

所述膜分离采用截留分子量4000-10000的管式复合膜进行超滤。

所述制备液相填料为C18，柱规格为30mm×250mm，柱温为室温，检测波长260nm，流动相为22-40%甲醇水溶液或15-30%乙腈水溶液。

本发明方法所用溶剂毒性较小，环保，经济效益好，能进行大规模生产，且工序简单，易于控制，分离效率高，产品纯度高。目前国内关于垂盆草苷的分离纯化研究报道较少，大孔树脂柱层析与高效制备液相色谱结合用于垂盆草苷的分离纯化也属首次，本发明方法为垂盆草苷的进一步开发利用提供了药理原料和理论支持。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

取1kg垂盆草烘干、粉碎，置于超临界萃取釜中萃取脱脂1h，设定脱脂温度为45℃，压力为20MPa，收集脱脂物用35%甲醇溶液恒温浸渍提取，再通过截留分子量4000的管式复合膜进行超滤，透过液上大孔树脂柱吸附，用35%乙醇溶液洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集洗脱液，减压浓缩干燥得垂盆草苷粗提物，用制备液相流动相（40%甲醇）溶解，经0.22μm滤膜滤过，采用制备液相色谱法纯化，制备液相填料为C18，柱规格为30mm×250mm，柱温为室温，检测波长260nm，收集对应流出液，浓缩干燥得到含量不低于98%的垂盆草苷0.84g。

实施例2：