[发明专利]鸭性别鉴定用PCR引物、鉴定方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物检测鉴定技术领域，具体涉及一种鸭性别鉴定用PCR引物、鉴定方法及试剂盒。

背景技术

目前，鸭子性别的鉴定方法一般为外形鉴别法、鸣管鉴别法、摸肛鉴别法和翻肛鉴别法。外形鉴别法和鸣管鉴别法虽然简单方便，但准确率较低，容易出现鉴别错误；而摸肛鉴别法和翻肛鉴别法必须在鸭子出壳后12h内进行操作，在此时间内，雌雄雏鸡生殖隆起的性状最显著，孵出后24小时以上，肛门发紧，难于翻开，而且生殖突起萎缩，甚至陷入泄殖腔深处，不便观察。

因此，需要开发一种简单方便，能够快速、准确鉴别鸭子性别的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种设计合理，可用于胚胎期及出雏后鸭性别快速鉴定的PCR引物。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种鸭性别鉴定用PCR引物PF(SEQ ID NO.1)和PR(SEQ ID NO.2)，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：

上游引物PF：5′-AGTGCATTGCAGAAGCAATATT-3′；

下游引物PR：5′-GCCTCCTGTTTATTATAGAATTCAT-3′。

本发明还提供了一种利用上述鸭性别鉴定用PCR引物鉴定鸭性别的方法，其特征在于，该方法为：以待测鸭的总DNA为模板，采用鸭性别鉴定用PCR引物进行PCR扩增，然后采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，当扩增产物只出现495bp的特异性扩增条带时判定为雄性鸭，当扩增产物出现495bp的特异性扩增条和351bp的特异性扩增条时判定为雌性鸭。

上述的方法，所述PCR扩增的反应体系由以下成分组成：模板DNA45ng～55ng，2×PCR扩增缓冲液12.5μL，5μmol/L上游引物2μL，5μmol/L下游引物2μL，加水至25μL。

上述的方法，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性5min，然后经94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸7min。

上述的方法，所述495bp的特异性扩增条带的核苷酸序列(SEQ ID NO.3)为：

AGTGCATTGC AGAAACAATA TTACAAGTAA CTATTTTCTT TAAATTTCAT CGTTTTAATT    60

ATATGTCTGC ATACAAATTA CTGGTTTAAT ATTTTTCATA ATGCAGTCTG AATTTGGGGC    120

AAAATAGTAA AAATCAAGCA CCTTTTTAGG ATTTCATAAC AGTAAAGTTC TGTGAAGCAG    180

AGGTTTATTG GTCTAATCTG TCTATTTTGC TTCTGTTGTT TGGCGTATTT GTATATTTTC    240

ACTAGGACTT GCTTTTTTTT TTTTTTTTTA GTTTGTTTAT ATTTTGAGAG CTTGTCTTGC    300

CTCCACATAT GGTTATTTAC ACCATGTCTT ATGTCATAGG TGGATTTTAA CAAGGAATTA    360

TAAAGCCCTC AGTAAAGGTT CAAAAGGCAG TACCTCTGGC TTTCTGAACA TTATGATGGA    420

ACTCAAAAAG TGTTGTAACC ATTGCTACCT CATTAAACCA CCAGATGATA ATGAATTCTA    480

TAATAAACAG GAGGC                                                     495

上述的方法，所述351bp的特异性扩增条带的核苷酸序列(SEQ ID NO.4)为：

AGTGCATTGC AGAAGCAATA TTACAAGTAA GTAATGACAC TTTTAAAATC GCACTATTTT    60

AATTAGATGT CTGTATGAAA AGTAATGAAG TGTAATAGTT TTCATGATGC AATTTGAAAT    120

GATATTTTGA GAGCTTACCA TTTGTGGAAA TATGACATGT TAGAAATTAC TTCCACTACA    180