[发明专利]一种淋巴细胞分离液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是指一种淋巴细胞分离液的制备方法。

背景技术

国内的淋巴细胞分离液已有二十多年的历史，主要以葡聚糖(右旋糖酐)和泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)为主要原料进行配制，其分离原理是：利用各类细胞本身的密度区别，在具有一定密度的分离液中经过离心，使各类细胞分离开来。但由于葡聚糖是由葡萄糖经过菌种发酵而得，因此其内毒素水平较高，会影响淋巴细胞的表面蛋白活性，且分离液中含不通透的离子diatrizoate(泛影葡胺)，会影响离子通透膜的Gibbs-Donnan平衡(吉布斯—道南膜平衡)。所以，传统的淋巴细胞分离液对细胞有毒性，分得细胞状态不好，影响细胞活性，不利于所提取细胞的后续培养及临床治疗的应用。

发明内容

本发明提出一种淋巴细胞分离液的制备方法，解决了现有技术中淋巴细胞分离液对细胞有毒性，分得细胞状态不好，影响细胞活性，不利于所提取细胞的后续培养及临床治疗的应用的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种淋巴细胞分离液的制备方法，包括如下步骤：

使用羟乙基淀粉配制质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液；

使用泛影葡胺配制质量分数为60％的泛影葡胺料液；

使用质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60％的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品；

通过过滤动物淋巴细胞分离液粗制品制取动物淋巴细胞分离液成品。

进一步地，使用羟乙基淀粉配制质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液的具体步骤为：称取羟乙基淀粉加热溶解于蒸馏水中，以双蒸水定容，制成质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液。

优选地，羟乙基淀粉的平均分子量为550万。

进一步地，使用泛影葡胺配制质量分数为60％的泛影葡胺料液的具体步骤为：称取泛影葡胺溶于双蒸水中，用氢氧化钠溶液调整pH至pH＝8.0，制成质量分数为60％的泛影葡胺料液。

优选地，氢氧化钠溶液的质量分数为10％。

进一步地，使用质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液和质量分数为60％的泛影葡胺料液制取动物淋巴细胞分离液粗制品的具体步骤为：

取质量分数为40％的羟乙基淀粉550料液加入蒸馏水制成质量分数为9％的羟乙基淀粉550溶液，备用；

取质量分数为60％的泛影葡胺料液，加入蒸馏水制成质量分数为34％的泛影葡胺溶液，备用；

将质量分数为34％的泛影葡胺溶液和质量分数为9％的羟乙基淀粉550溶液混和均匀并将其降温至20℃；

用质量分数为60％的泛影葡胺料液调整质量分数为34％的泛影葡胺溶液和质量分数为9％的羟乙基淀粉550溶液的混合液，使其在20℃下比重为1.065～1.090g/ml，即得动物淋巴细胞分离液粗制品。

进一步地，通过过滤动物淋巴细胞分离液粗制品制取动物淋巴细胞分离液成品的具体步骤为：用漏斗、亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液灌装于棕色玻璃瓶中，高压灭菌后即得动物淋巴细胞分离液成品。

进一步地，用漏斗、亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液灌装于棕色玻璃瓶中，高压灭菌后即得动物淋巴细胞分离液成品的具体步骤为：用G3漏斗、含100nm亲水性滤芯的亲水性微孔滤器装置以及隔膜真空泵以≤0.06MPa的负压过滤动物淋巴细胞分离液粗制品，将滤液于百级工作台内灌装于棕色玻璃瓶中，120℃高压灭菌20分钟，即得动物淋巴细胞分离液成品。

本发明的有益效果为：

1、本发明的淋巴细胞分离液所用的主要原料之一为羟乙基淀粉，替代了右旋糖酐，生物安全性高，无细胞毒性，其内毒素含量低，使得分离的淋巴细胞状态好，活力高，除应用于科学研究外还可广泛应用于临床诊断，具有良好的市场前景。

2、本发明的淋巴细胞分离液在制备过程中不产生任何废料和污染物，也不产生噪音等，对环境没有影响。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一种淋巴细胞分离液的制备方法的步骤流程图。

具体实施方式