[发明专利]梨黑星病抗性的离体鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物病理学领域，具体地说，涉及梨黑星病抗性的离体鉴定方法。

背景技术

梨黑星病(Venturia nashicola，Venturia pirina)又称疮痂病，是梨种植地区普遍发生的一种病害。梨黑星菌，属于子囊菌纲(Ascomycetes)，座囊菌目(Dothideals)，多孢菌科(Pleosporaceae)，黑星菌属(Venturia de Not)。梨黑星菌分为两大类V.nashicola和V.pirina，其中V.pirina以洋梨为寄主，V.nashicola以日本梨和中国梨为寄主。梨黑星病主要侵染梨树的绿色幼嫩组织，包括花序、叶片、叶柄、新梢、芽鳞及果实等，其中以叶片、果实为主。梨黑星病侵染的最典型症状是在病部产生明显的黑色霉层，呈鸡爪形状，又有黑霉病之称。叶片受害多发生在叶背，病部先呈现黄色，随后长出黑色霉斑，叶片正面呈现多角形或圆形褪绿黄斑，严重时，叶片正反面都长满黑色霉层，致使叶片干枯脱落。叶柄受害时，会产生圆形或长条状霉斑造成落叶。嫩梢发病时，除形成条状霉斑外，后期皮层龟裂，呈粗皮状的疮痂状。果实受害时，初期呈现淡黄色斑点，随后逐渐扩大长出黑霉层，严重时病部凹陷木栓化，停止生长呈畸形，易脱落。

目前对梨黑星病的防治主要是化学防治，化学防治成本高、效率低、能够引起病菌生理小种的变异且容易造成环境污染，解决这种困境的方法是培育抗病品种，而培育抗病品种的关键是早期的抗病性评价。目前对抗病性的评价方法多采用分生孢子田间接种，田间接种首先是过程繁琐，包括喷施杀菌剂、套袋等，其次是或多或少会受到环境条件的影响，另外对病原需求量大。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种在梨离体叶片上接种梨黑星病菌的方法，从而评价品种的抗病性。

为了实现本发明目的，本发明的一种梨黑星病抗性的离体鉴定方法，从梨树上取旺盛生长的新梢顶部起第三片叶，置于铺有湿毛巾的托盘上，叶片背面向上，向叶片背面喷布浓度为5×10⁴个孢子/ml的梨黑星菌(Venturia de Not)的分生孢子液至淋湿，接种后套上塑料袋密封保湿，置于25℃人工气候箱中，15天后根据发病情况鉴定出抗病品种。

本发明提供的梨黑星病抗性的离体鉴定方法，是将梨整个叶片上都喷布分生孢子液至淋湿，旨在获得在梨叶片离体状态下接种梨黑星病菌后的病情指数，如果这个病情指数比较接近于田间接种的结果，即为期望获得的比较准确的离体接种方法。

本发明方法是利用梨的离体叶片在室内进行接种鉴定，通过严格控制接种条件并置于人工气候箱中培养，使环境条件带来的影响降至最低，并且省去了喷施杀菌剂和套袋等一系列步骤，操作过程简单，能够快速、高效、准确地完成对较大群体的梨黑星病抗病性的离体评价，而对其抗病性遗传规律进行分析，极具实用意义。

附图说明

图1为鸭梨×03-04-034杂交后代群体病斑面积/叶片面积次数分布图。

图2为鸭梨×03-08-080杂交后代群体病斑面积/叶片面积次数分布图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1梨黑星病抗性的离体鉴定方法

1.1离体梨叶片上接种梨黑星病菌的方法，包括如下步骤：

1.1.1材料采用抗病优系03-04-034、03-08-080，高感品种鸭梨、京白梨及中抗品种雪花梨，旺盛生长中新梢的第3片叶，其中03-04-034是从京白梨×鸭梨杂交群体中筛选出来的高抗黑星病的优系，03-08-080是从鸭梨×京白梨杂交群体中筛选出来的高抗黑星病的优系，鸭梨、京白梨、雪花梨是中国传统的名优品种。

1.1.2采用完全试验设计，设置2个因素：温度和菌种形态；其中温度设置4个水平：20℃、25℃、30℃、35℃；菌种形态设置6个水平：菌丝、菌饼、分生孢子液浓度为5×10³个孢子/ml、分生孢子液浓度为5×10⁴个孢子/ml、分生孢子液浓度为5×10⁵个孢子/ml，分生孢子液浓度为5×10⁶个孢子/ml。