[发明专利]肝吸虫IgG抗体酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种肝吸虫IgG抗体酶联免疫试剂盒。

背景技术

肝吸虫病又称华支睾吸虫病或华肝蛭病，是我国常见的食源性寄生虫病之一。肝吸虫成虫可长期寄生于人的肝胆管内，对肝胆系统造成慢性损伤，引起胆管局限性扩张、胆管炎、胆管上皮细胞腺瘤样增生、肝硬化甚至诱发肝胆管肿瘤。

目前肝吸虫病的检测主要依靠病原学检查和免疫学检测。传统的病原学方法是镜检粪便中的虫卵，由于肝吸虫排卵具有周期性且虫卵很小，容易漏诊，且操作费时费力，不适合大规模的流行病学调查。免疫学检测方法具有高度的敏感性和特异性，尤其是ELISA方法在目前的流行病调查和临床诊断中应用广泛。目前用于肝吸虫病检测的ELISA试剂盒是用成虫粗抗原检测血清中总IgG抗体，由于粗抗原的成分复杂，难以纯化，因此存在检测结果不够准确，假阴性和假阳性率都比较高的缺点。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，发明人以肝吸虫成虫粗抗原中分离得到的一种可溶性抗原作为抗原，制备高度特异的肝吸虫IgG抗体，并在此基础上构建的酶联免疫试剂盒可广泛应用于肝吸虫的检测，且具有特异性好，灵敏度高，可进行定量检测，检测结果准确性好，操作简单、快捷，检测成本低等优点。

本发明提供一种肝吸虫IgG抗体酶联免疫试剂盒，包括肝吸虫可溶性抗原标准液、肝吸虫IgG抗体、酶标板、酶结合物、底物显色液、稀释液、洗涤液和终止液；所述肝吸虫可溶性抗原由感染肝吸虫病人血清中分离纯化而得。

采用上述技术方案，可对肝吸虫进行高通量的定量检测，使用方便，特异性好，灵敏度高，检测成本低。

作为本发明的进一步改进，所述酶标板包被有肝吸虫可溶性抗原。所述酶标板为常用的聚苯乙烯微孔板，加入纯化后的肝吸虫可溶性抗原，包被过夜。

作为本发明的进一步改进，所述酶结合物采用辣根过氧化物酶进行标记。

作为本发明的进一步改进，所述底物显色液采用四甲基联苯胺。

作为本发明的进一步改进，所述稀释液为pH6~ pH8的缓冲溶液，具体可以为磷酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液。

作为本发明的进一步改进，所述终止液采用硫酸或盐酸。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：肝吸虫可溶性抗原的纯度高，制备的肝吸虫IgG抗体特异性好，在此基础上构建的酶联免疫试剂盒标准曲线线性关系好，可广泛应用于肝吸虫的检测，且具有特异性好，灵敏度高，可进行定量检测，检测结果准确性好，操作简单、快捷，检测成本低等优点。

附图说明

图1 为本发明的检测标准曲线。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例一  目标抗原的分离和纯化。

目标抗原为肝吸虫可溶性抗原，由感染肝吸虫病人血清中分离，并经亲和层析柱纯化而得。该目标蛋白通过SDS-PAGE和2-D PAGE验证，未见其他杂蛋白条带，纯度满足免疫要求。

实施例二  肝吸虫IgG抗体的制备和纯化。

使用纯化后的肝吸虫可溶性抗原免疫6周雌性balb/c鼠，每组3只。首次免疫注射时，分别50mg/mL的免疫抗原100μL，与等量弗氏完全佐剂充分乳化，腹腔直接注射。间隔两周后，取同样的抗原，与100μL不完全佐剂乳化，同样方法注射。免疫小鼠后，应用细胞培养和杂交瘤技术制备肝吸虫IgG抗体。制得的肝吸虫IgG抗体使用现有抗体纯化技术进行纯化，纯化后的肝吸虫IgG抗体经Western-Blotting检测，与肝吸虫可溶性抗原特异性结合，未和其他蛋白产生交叉反应。

实施例三  肝吸虫IgG抗体酶联免疫试剂盒的构建。

酶标板的包被：将肝吸虫可溶性抗原加入酶标板（聚苯乙烯微孔板）中，包被过夜，采用5%脱脂奶粉封闭，真空干燥。

肝吸虫IgG抗体采用PBS 以1:10000稀释得到抗体工作液。

酶结合物采用PBS 以1:10000稀释得到酶结合物工作液。

本发明提供的肝吸虫IgG抗体酶联免疫试剂盒包括：肝吸虫可溶性抗原标准液7瓶，浓度分别为0mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、4mg/mL、8mg/mL、16mg/mL、32mg/mL、肝吸虫IgG抗体、包被了肝吸虫可溶性抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记的酶结合物、四甲基联苯胺底物显色液、pH7的磷酸盐稀释液、洗涤液和硫酸终止液；