[发明专利]一种制备罗莫肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备罗莫肽的方法，应用本方法制备罗莫肽操作简便，原料易得，所得产物纯度高，便于纯化，收率较高，生产成本较低，适于大量生产。

背景技术

罗莫肽(romurtide)，化学名为N²-(N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺)-N⁶-硬脂酰-L-赖氨酸(N²-[N²-[N-(N-acetylmuramoyl)-L-alanyl]-D-αglutaminyl]-N⁶-(1-oxooctadecyl)-L-Lysine)，又称为DJ-7041，MDP-LYS-L18，Muroctasin，Nopia，CA登记号为[78113-36-7]，具有如下化学结构式：

罗莫肽是一种胞壁酰二肽(MDP)类衍生物，属于集落刺激因子激动剂。其主要作用机理为，通过细胞因子网络的活性，诱导集落刺激因子分泌，促进骨髓中造血干细胞的增殖与分化，从而使外周血液中的白细胞和血小板增多，升高辅助性T细胞活性，激活中性粒细胞和巨噬细胞功能，增强对感染的非特异性抵抗力，增强抗生素的疗效。罗莫肽于1991年在日本上市，用于肿瘤病人的辅助治疗，由于其作用独特，应用前景十分广阔。

有关罗莫肽的合成文献可见US4317771和EP002367，其均采用全液相合成，其路线是以氨基酸为起始原料，首先用叔丁氧羰-L-丙氨酸(1)与D-异谷氨酰胺-r-苄酯(2)在N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)/二环己基碳二亚胺(DCC)作用下生成保护二肽BOC-Ala-D-iso-Gln(OBzl)(3)，用Pd/C催化氢化得脱苄基保护二肽BOC-Ala-D-iso-Gln(OH)(4)，与N⁶-苄氧羰基-L-赖氨酸苄酯(5)在氯甲酸乙酯和三乙胺作用下缩合生成保护三肽BOC-Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(6)，用三氟乙酸脱去BOC保护基得中间体Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(7)，后者与1-苄基-4，6-O-苯亚甲基-N-乙酰胞壁酸[(B1，B4，6-NAcMur或保护胞壁酸(8)]在(HOSu)/(DCC)作用下生成保护胞壁酰三肽B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(9)，用乙酸处理脱去4，6-O-苯亚甲基得到部分保护化合物B1-NAcMur-Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(10)，进而催化氢化得N-(N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺基)-L-赖氨酸(11)(化学式NAcMur-Ala-D-iso-Gln-Lys)；后者与硬脂酸的N-羟基-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺酯反应得罗莫肽。CN200910155724则采用固、液相结合的合成方法，先用固相合成Fmoc-Ala-iso-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Wang，后与保护胞壁酸(8)缩合得保护胞壁酰三肽，用K试剂切割Wang树脂所得产物与硬脂酸反应生成罗莫肽。以上方法合成罗莫肽时均是先制备胞壁酰三肽而后与硬脂酸反应，我们按文献方法多次合成罗莫肽，均发现由于活性反应基团除氨基外，还有三个羟基，因而产物中副产物多，所得终产物纯度不高(附图1-2)，难于纯化；并且中间体胞壁酰三肽经十几步反应生成，因而难得和昂贵，再与硬脂酸反应消耗较多，以胞壁酸计收率降低，生产成本过高。

因此，现有技术需要一种操作简便，所得产物纯度高(附图3)，便于纯化，避免了重要中间体胞壁酰三肽的消耗，收率较高，成本较低，适于工业化生产的制备罗莫肽的方法。

发明内容

本发明的发明人经过大量创造性劳动后，提供了一种新的合成罗莫肽的方法。该方法与文献方法完全不同的合成策略，避免了文献报道的因胞壁酸三肽与硬脂酸反应时产生多重产物的可能性，所得终产物纯度高，彻底解决了现有技术制备该化合物不易纯化问题；同时胞壁酸与硬脂酰三肽直接反应，避免了难得贵重的重要中间体胞壁酰三肽的消耗，收率较高，成本较低，适于工业化生产。