[发明专利]使用HPLC-DAD同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药质量检测领域，具体是一种使用HPLC-DAD同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法。      

背景技术

丹红注射液是由传统的活血化瘀中药丹参、红花提取的复方制剂，具有活血化瘀，改善微循环，降低血液黏度，加快血液流速，清除氧自由基，保护细胞免受氧化损伤，抑制动脉粥样硬化等作用。在临床上广泛用于冠心病、心绞痛、心肌梗死、急性脑梗死、慢性肺心病、血栓闭塞性脉管炎、萎缩性胃炎以及高血压肾病等。丹红注射液的君药丹参主要含丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A等水溶性成分。《国家中成药标准汇编、内科、心系分册》中关于丹红注射液的国家药品标准(试行)颁布件中仅对丹参素钠和原儿茶醛2种有效成分进行质量控制。由于丹红注射液中所含成分比较复杂，难以将6种有效成分与其他成分很好的分离，达到HPLC定量测定的要求。鉴于这一原因，故建立一种同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法具有重要的现实意义。 

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种使用HPLC-DAD同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法。可以有效解决以丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A作为指标性成分，同时进行含量测定，为丹红注射液质量标准奠定基础的问题，实现本发明的具体技术方案是： 

一种使用HPLC-DAD同时测定丹红注射液中6种有效成分含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）精密吸取丹红注射液，加超纯水稀释，摇匀，经滤膜滤过，即得供试品溶液；

2）精密称取对照品丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A，分别置容量瓶中，加超纯水溶解，稀释，混匀，作为对照品储备溶液，于4℃ 冰箱内冷藏备用；

3）再分别精密吸取6种对照品储备溶液，加超纯水稀释，准确配制丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的混合对照品溶液；

4）用以下色谱条件进行HPLC-DAD法检测：色谱柱：Eclipse XDB-C₁₈  4.6×150 mm，5 μm；流动相包括流动相A：乙腈和流动相B：体积百分含量0.05% - 0.1%的磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式，乙腈占流动相的体积比在下述范围内随着时间的增加而增加：0-6 min，5%-5%；6-16 min， 5%-15%；16-30 min， 15%-26%；35-40 min， 26%-27%；DAD检测器检测波长：检测丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、丹酚酸A 使用270-290 nm，检测咖啡酸、迷迭香酸使用320 -340nm；柱温：25-35℃；流速：0.7-1.2 mL·min^-1；

5）取混合对照品溶液，分别用超纯水稀释不同的倍数，取上述稀释混合对照品溶液与原混合对照品溶液各进样10 μl，记录色谱图和峰面积，分别以6种有效成分色谱峰的峰面积Y为纵坐标，以浓度X，μg·mL^-1为横坐标进行线性回归，得标准曲线的回归方程和相关系数；

6）分别取不同批号的丹红注射液，按供试品溶液的制备方法配制样品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积，每批样品测定3次，计算得到不同批号丹红注射液中丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A的含量。

所述的方法，其特征在于步骤1）中精密吸取丹红注射液2mL，置10mL容量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，即得供试品溶液。 

所述的方法，其特征在于步骤2）中精密称取对照品丹参素钠6.55mg、原儿茶醛5.05mg、咖啡酸1.55mg、迷迭香酸5.45mg、丹酚酸B10.95mg、丹酚酸A5.60mg，分别置5mL容量瓶中，加超纯水溶解，稀释至刻度，混匀，作为对照品储备溶液，于4℃ 冰箱内冷藏备用。 

所述的方法，其特征在于步骤3）中再分别精密吸取一定量的6种对照品储备溶液，加超纯水稀释，准确配制丹参素钠1.310 mg·mL^-1、原儿茶醛0.101 mg·mL^-1、咖啡酸0.0041 mg·mL^-1、迷迭香酸0.109 mg·mL^-1、丹酚酸B 0.219 mg·mL^-1、丹酚酸A3.360 mg·mL^-1的混合对照品溶液。 

所述的方法，其特征在于步骤4）中流动相B磷酸水溶液的体积百分含量为0.1%。