[发明专利]ABCC1基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种ABCC1基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

ABCC亚家族属于ABC转运体超家族，ABCC1是ABCC亚家族第一个被发现的成员。ABCC1也称为多药耐药相关蛋白1(mul tidrug resistance protein 1，MRP1)，位于16号染色体16p13.1上，它编码蛋白分布于体内几乎所有组织，可以转运多种不同底物，包括药物、重金属离子、机体代谢毒物、谷胱甘肽、葡糖醛酸和硫结合物。随着测序技术的发展，近年来发现很多ABCC1基因多态，越来越多的证据表明ABCC1基因变异与药物耐药和疾病易感性密切相关。

目前，ABCC1基因突变检测方法主要有：PCR-RFLP、直接测序法和荧光定量PCR技术，PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。而其它以PCR为基础的检测技术，如直接测序法和荧光定量PCR技术，则存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供ABCC1基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测ABCC1基因七种常见基因型A866T、C218T、G2168A、G3173A、G16237754A、C16238494T和G1299T的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下.

一种ABCC1基因突变检测液相芯片，包括有：

(A).针对ABCC1基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对A866T位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16，针对C218T位点的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18，针对G2168A位点的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20，针对G3173A位点的SEQ ID NO.21及SEQ ID NO.22，针对G16237754A位点的SEQ ID NO.23及SEQ ID NO.24，针对C16238494T位点的SEQ ID NO.25及SEQ ID NO.26，和/或针对G1299T位点的SEQ ID NO.27及SEQ ID NO.28；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.14；

(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.29～SEQ ID NO.42，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；

(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

在其中一些实施例中，所述扩增引物为：针对A866T位点的SEQ ID NO.43及SEQ ID NO.44，针对C218T位点的SEQ ID NO.45及SEQ ID NO.46，针对G2168A位点的SEQ ID NO.47及SEQ ID NO.48，针对G3173A位点的SEQ ID NO.49及SEQ ID NO.50，针对G16237754A位点的SEQ ID NO.51及SEQ ID NO.52，针对C16238494T位点的SEQ ID NO.53及SEQ ID NO.54，和/或针对G1299T位点的SEQ ID NO.55及SEQ ID NO.56。