[发明专利]一种表达人抗体全基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体及其方法有效
| 申请号： | 201210106947.1 | 申请日： | 2012-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN102634542A | 公开（公告）日： | 2012-08-15 |
| 发明（设计）人： | 曾毅;贾润清;管永军;余双庆;周玉柏;冯霞 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学;曾毅;贾润清;管永军 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京金阙华进专利事务所(普通合伙) 11224 | 代理人： | 吴鸿维 |
| 地址： | 100022 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 抗体 基因 重组 相关 病毒 raav 载体 及其 方法 | ||
1.一种表达人抗体全基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体，其特征在于，利用AAV2/1穿梭表达载体pSNAV构建而成。
2.如权利要求1所述的重组腺相关病毒(rAAV)载体，其特征在于该载体的ITR之间的序列为：5‘-ITR-promoterl-murine IgG1 signal peptide-L chain-promoter2-murine IgG1 signal peptide-H chain-SV40 polyA-ITR。
3.如权利要求1、2所述的重组腺相关病毒(rAAV)载体，其特征在于：在pSNAV的基础上具有5‘-ITR-promoterl-murine IgG1 signal peptide-L chain-promoter2-murine IgG1 signal peptide-H chain-SV40 polyA-ITR-Ampicillin resistance-ColE ori-SV40启动子-neo-SV40 Ploy A的基因结构单元。
4.如权利要求2或3所述的重组腺相关病毒(rAAV)载体，其特征在于：所述的promoter1为：hEF-1α promoter；所述的promoter2为hCMV IE promoter。
5.如权利要求1-4所述的重组腺相关病毒(rAAV)载体，其特征在于，该载体为pSNAV/eLcH，所表达的抗体为HIV人中和抗体2G12全基因。
6.一种构建表达人抗体全基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体的方法，其具体构建方法为：
1)通过PCR的方法改造pSNAV载体，并在载体pSNAV的多克隆位点插入linker；
2)利用PCR技术扩增出hEF-1α promoter、murine IgG1 signal peptide、目的抗体的轻链、hCMV IE promoter、murine IgG1 signal peptide、目的蛋白的重链、SV40 polyA等基因结构单元；
3)利用酶切位点将步骤2)中各结构单元顺次连接，克隆到改造好的pSNAV载体的多克隆位点中，形成5‘-ITR-promoter1-murine IgG1 signal peptide-Lchain-promoter2-murine IgG1 signal peptide-H chain-SV40 polyA-ITR的基因结构单元；
4)即得到重组腺相关病毒(rAAV)载体。
7.权利要求6所述的方法，其特征在于步骤4)中所述的载体为权利要求5所述的pSNAV/eLcH。
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