[发明专利](1,3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸系列化合物的制备及其在黑色素瘤治疗中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及(1，3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸系列化合物及其制备方法与抗肿瘤药物。 

背景技术

随着人类生活和环境的变化，恶性肿瘤已经成为一种严重威胁人类健康的疾病。几乎所有的肿瘤都与细胞的异常增殖有关。Ras/Raf/MEK/ERK级联是调节细胞增殖的重要信号通路，被细胞外的生长因子、激素、细胞因子所激活，从而调控细胞的复制、生长、抗凋亡和分化。如果这条通路突变或者被异常开启，细胞增殖就会失控，导致肿瘤的发生。 

Ras/Raf/MEK/ERK级联中，Raf是很多药物的重要靶点，Raf的突变和异常表达多见于黑色素瘤、结肠癌、卵巢癌、甲状腺癌。在哺乳动物中，Raf蛋白有三个成员：A-Raf、B-Raf和C-Raf，其中B-Raf与肿瘤发生关系最为密切，有66％的黑色素瘤B-Raf都会发生突变。大多数的B-Raf突变都是V600E型突变，B-Raf的表达会提高500倍，导致细胞的异常增殖和癌变。索拉菲尼是一种靶向B-Raf的抗肿瘤药物，但是在黑色素瘤的临床治疗效果不显著。 

本文我们设计合成了(1，3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸系列化合物，并对其B-Raf和黑色素瘤抑制活性进行评价，吡唑环类化合物上的氮原子可以和B-Raf的活性位点有很好的氢键作用，而苯甲酸里的苯环结构可以和活性位点有疏水作用，从而特异性抑制B-Raf的活性，达到治疗黑色素瘤的临床治疗效果。 

发明内容

本发明的目的在于提供一类新型(1，3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸系列化合物以及它们的制备方法与用途。 

本发明的技术方案如下： 

1.一类(1，3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸衍生物，其特征是它有如下通式： 

结构式中R1为：4-氟、氯、甲基、甲氧基。 

R2为：4-氟、氯、氢、甲氧基。 

2.一种制备上述的(1，3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸衍生物的方法，它由下列步骤组成： 

步骤1.将取代基苯乙酮(20mmol)、盐酸苯肼(25mmol)、无水乙酸钠(30mmol)分别溶于乙醇，磁力搅拌，50-60℃反应3h(TLC检测反应进行程度)。反应完毕后将反应液旋干，乙酸乙酯和水萃取2-3次，旋干有机层，得固体。 

步骤2.先将DMF(4ml)和POCl₃(5ml)混合冰浴30min，然后将步骤1所得固体溶于3ml DMF滴加至上述混合液中，逐渐转入常温至70-80℃反应5h，冷却至常温后，倒入冰水中，用50％NaOH调pH至7-8，抽滤并水洗3遍，烘干后得固体。 

步骤3.将步骤2所得产物(1mmol)溶于乙醇(20ml)，加入NaBH₄(2mmol)。待TLC检测原料反应完毕后旋干反应液，乙酸乙酯和水萃取2-3次，无水Na₂SO₄干燥，旋干有机层即得到固体物。重结晶或过柱纯化固体物可得到白色固体。 

步骤4.将不同取代基的苯甲酸溶于二氯亚砜，回流3h，旋干，溶于二氯甲烷。滴加至步骤3所得产物的二氯甲烷溶液中，加入碳酸钾固体，室温反应TLC检测反应完毕，旋干后乙酸乙酯和水萃取，无水Na₂SO₄干燥，旋干有机层得到固体。甲醇重结晶得到白色固体1-15。 

本发明的(1，3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸类化合物具有抑制鼠源黑色素瘤细胞A375增殖的作用。因此本发明的(1，3-二苯基-1氢-4-吡唑基)甲基苯甲酸类化合物可做潜在的抗肿瘤药物。 

具体实施方式

实施例一：(3-(4-氟苯基)-1-苯基-1氢-4-吡唑基)甲基4-氟苯甲酸(化合物1)的 制备