[发明专利]对嗜肺军团菌O9型的wzm基因特异的核苷酸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种核苷酸及其应用，尤其涉及一种对嗜肺军团菌血清型O9型(Legionella pneumophila serogroup 9)的wzm (LPS O-抗原的ABC转运子，ABC transporter of LPS O-antigen，以下简称wzm)基因特异的核苷酸及其应用。

背景技术

军团菌最初是在美国发现的，是一种的无芽胞革兰氏阴性杆菌，对自然环境因素抵抗力较强，主要是引起呼吸道传染疾病，可通过气溶胶的方式在空气中散布，人类会因为吸入含菌的气溶胶而感染，引起军团病（Legionnaires disease，LD）。目前已知军团菌有52个种70多个血清型，能引起人类疾病的约有20种。常见的有嗜肺军团菌（Legionellapneumophila，LP）、 米氏军团菌（Legionella micdadei）、 博氏军团菌（Legionella bozemanii）、 菲氏军团菌（Legionellafeeleii）、 杜莫夫军团菌（Legionella dumoffii）和 长滩军团菌（Legionella longbeachae）等。 

其中嗜肺军团菌与人类疾病关系最为密切。根据O抗原的不同，嗜肺军团菌可分为15个血清型。其中大约有70%的军团菌感染是由嗜肺军团菌O1引起的，20-30%是由其它血清型引起的，非嗜肺军团菌导致约5-10%的军团菌感染。

嗜肺军团菌为需氧革兰阴性杆菌，兼性胞内寄生菌，无荚膜 ，不产酸，不产气， 有一根至数根侧鞭毛或端鞭毛，可运动，菌体长 2-50μm,宽0.5-1μm。该菌生长营养要求较高，生长时需要半胱氨酸，甲硫氨酸和铁离子等，在活性炭 - 酵母浸出液琼脂（ BCYE） 培养基上可生长，在GVPC 平板上呈灰白色，边缘有紫蓝色光泽，挑起有拉丝；在含 2.5 % - 5.0 %的 CO₂环境中生长很好, 厌氧条件下不生长。最适温度为 35 ℃ - 36℃， 具有一定的耐酸性和耐热性菌落颜色一般呈灰白色、紫色、蓝色或绿色, 但在普通血平板、普通琼脂或巧克力琼脂上不生长。

嗜肺军团菌在普通自来水中可存活400天以上，在60℃ 左右甚至在火山口附近的水塘里都能发现军团菌的踪迹。我国报告的病例多是嗜肺军团菌血清 O1 型、O5型、O6型。在欧美各国嗜肺军团菌肺炎占肺炎病例中的2.4 %-8.4 %。

随着分子技术特别是PCR技术的发展，许多分子生物学方法被用于军团菌分子分型和流行病学研究。目前已用于军团菌分型的4种常用分子分型技术为：随机扩增多态性 DNA (Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD)、脉冲场凝胶电泳( Pulsed-Field Gel Electrophoresis，PFGE)、扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism，AFLP)、核酸测序分型(Sequence-based typing，SBT)。由于其一次即可分离出大量DNA片段，且具有操作简便，重复率好等优势，先后用于军团菌分子分型和流行病学调查。

聚合酶链式反应技术(Polymerase chain reaction，简称PCR技术)作为微生物检测的技术目前正在得到认同和推广，该技术相对于传统的方法有高通量、检测速度快、特异性强、灵敏度高等优点，只需对样品进行简单的预增菌或增菌过程，再通过离心及裂解制备细菌DNA模板，就可以在高特异性引物介导下的PCR过程中扩增目标序列，达到检测样品中是否含有待测的致病性微生物的目的。PCR的扩增过程仅需2个小时。这对检验检疫部门和临床检验无疑极大提高了工作速度和降低了工作成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对嗜肺军团菌血清型O9型的wzm基因特异的核苷酸，所述核苷酸为：

1）SEQ ID NO:1所示的核苷酸和/或SEQ ID NO:2所示的核苷酸；

2）与1）所示的核苷酸互补的核苷酸。

上述核苷酸可以用于制备检测嗜肺军团菌血清型O9型的wmt基因的PCR试剂盒、基因芯片或微阵列；所述嗜肺军团菌血清型O9型可以取样于自来水、矿泉水、空调冷却水的培养物的粗提液，或是嗜肺军团菌血清型O9型的纯培养物的粗提液等，均采用常规的酚氯仿法制备。