[发明专利]一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201210100785.0 | 申请日： | 2012-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN102618508A | 公开（公告）日： | 2012-08-01 |
| 发明（设计）人： | 张存;崔尚金;叶伟成;陈柳;余斌;倪征;云涛;华炯钢;张燕 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/35;C12N15/34;C12N15/63;A61K39/295;A61K39/12;A61K39/23;A61K39/245;A61P31/20;A61P31/22;C12R1/93 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310021 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 狂犬病毒 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，该病毒含有由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因。
2.根据权利要求1所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，该病毒包含Pcmv-V2C-BGH-pA表达框；
其中V2C表示由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因；Pcmv表示启动子CMV；BGH-pA表示人β球蛋白基因多聚腺苷酸尾。
3.根据权利要求1或2所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，该病毒的gE基因被所述外源基因替换。
4.根据权利要求1或2所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，该病毒的TK基因部分缺失。
5.根据权利要求1所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，所述的猪细小病毒VP2基因碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
6.根据权利要求1所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，所述的口蹄疫病毒2A基因碱基序列如SEQ ID NO.2所示。
7.根据权利要求1所述的重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，所述的猪圆环病毒Cap基因碱基序列如SEQ ID NO.3所示。
8.一种重组猪伪狂犬病毒的构建方法，包括：
(1)将pHA2质粒插入到原始猪伪狂犬病毒的TK基因内，获得rPRV；
(2)将rPRV基因组转化大肠杆菌(E.coli)DH10B菌株，获得pPRV；
(3)将pPRV的标记基因GFP的CMV启动子更换为EF1启动子，获得pPRV-EF1；
(4)将Pcmv-V2C-BGH-pA表达框替换pPRV-EF1的gE基因，获得pPRV-V2C-ΔgE；
其中V2C表示由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因；Pcmv表示启动子CMV；BGH-pA人β球蛋白基因多聚腺苷酸尾；
(5)pPRV-V2C-ΔgE与pCAGGS-NLS/Cre两种质粒共转染Vero细胞系，筛选获得删除pHA2质粒的rPRV-V2C-ΔgE。
9.根据权利要求1～7任一所述的重组猪伪狂犬病毒在制备动物疫苗中的应用。
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