[发明专利]具有多个除草剂抗性AHASL1等位基因的除草剂抗性向日葵植物及使用方法

权利要求书

1.用于向日葵AHASL1基因分型的方法，所述方法包括步骤：

(a)从向日葵植物中获得基因组DNA；

(b)利用所述DNA作为模板进行第一次聚合酶链反应(PCR)扩增，其包含所述DNA、聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸、正向AHASL1引物和反向野生型AHASL1引物，其中所述反向野生型AHASL1引物与包含SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向野生型AHASL1引物3’端核苷酸的核苷酸是SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互补核苷酸；

(c)利用所述DNA作为模板进行第二PCR扩增，其包含所述DNA、聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸、所述正向AHASL1引物和突变型反向AHASL1引物，其中所述反向突变型AHASL1引物与包含SEQ ID NO：14所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向突变型AHASL1引物3’端核苷酸的核苷酸是SEQ ID NO：14所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互补核苷酸；以及

(d)检测所述第一和所述第二PCR扩增的产物；

其中所述正向AHASL1引物包含对应于(ACC)_n区域5’的向日葵AHASL1基因区域的核苷酸序列。

2.权利要求1的方法，其中所述反向野生型AHASL1引物包含SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

3.权利要求1的方法，其中所述反向突变型AHASL1引物包含SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。

4.权利要求1的方法，其中所述正向AHASL1引物与包含SEQ ID NO：12所示核苷酸序列的互补序列的核苷酸序列退火。

5.权利要求1的方法，其中所述正向AHASL引物包含SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

6.用于向日葵AHASL1基因分型的试剂盒，所述试剂盒包含

(a)正向AHASL1引物，该引物包含对应于(ACC)_n区域5’的向日葵AHASL1基因区域的核苷酸序列。

(b)反向野生型AHASL1引物，其中所述反向野生型AHASL1引物与包含SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向野生型AHASL1引物的3’端核苷酸的核苷酸是SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互补核苷酸，以及

(c)反向突变型AHASL1引物，其中所述反向突变型AHASL1引物与包含SEQ ID NO：14所示核苷酸序列的核苷酸序列退火，其中位于所述反向突变型AHASL1引物的3’端核苷酸的核苷酸是SEQ ID NO：14所示核苷酸序列的第1位核苷酸的互补核苷酸。

7.权利要求6的试剂盒，其进一步包含能够催化向日葵AHASL基因的第一片段和向日葵AHASL基因的第二片段的PCR扩增的聚合酶，其中第一片段位于向日葵AHASL1基因中所述正向AHASL1引物的所述退火位点和所述反向野生型AHASL1引物的所述退火位点之间，第二片段位于向日葵AHASL1基因中所述正向AHASL1引物的所述退火位点和所述反向突变型AHASL1引物的所述退火位点之间。

8.权利要求6的试剂盒，其中所述正向AHASL1引物与包含SEQ ID NO：12所示核苷酸序列的互补序列的核苷酸序列退火。

9.权利要求6的试剂盒，其中所述正向AHASL引物包含SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

10.权利要求6的试剂盒，其中所述反向野生型AHASL1引物包含SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

11.权利要求6的试剂盒，其中所述反向突变型AHASL1引物包含SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列。

12.分离的多核苷酸，其包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17中所示的核苷酸序列。