[发明专利]一种鸡矮脚相关的分子检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物遗传育种分子标记辅助选择技术领域，具体提供导致鸡性连锁矮小的突变的检测方法。 

背景技术

性连锁矮小鸡（Sex-linked Dwarf Chicken，SLD）具有基础代谢低，耗料少，饲养密度大，成本低等优点，因而在肉蛋鸡育种中有很高的经济价值。 

目前已知能导致鸡矮小表型的基因有8 种，它们有的是隐性致死，有的作用方式不详，有的表现为常染色体遗传，有的表现为性染色体遗传，其中引起人们广泛注意并应用于实际。它被认为是唯一对鸡本身健康无害而对人有益的突变基因。在dw基因的存在下可导致鸡生长速度的下降, 使鸡的体形变小。因而它在肉鸡与蛋鸡育种中具有很高的经济价值。 

性连锁矮小是由于GHR基因突变造成的。鸡GHR基因定位在Z染色体短臂上，共编码608个氨基酸（包括16个氨基酸的信号肽）。其中外显子1长度不一，调控转录的起始；翻译起始位点位于外显子2上，该外显子编码前体蛋白的信号肽；cGHR基因缺少外显子3（和人的GHR基因比较）；外显子4～7编码GHR蛋白的细胞外结构域；外显子8编码蛋白的跨膜结构域；外显子9～10编码蛋白的细胞内结构域。 

1991年Burnside等克隆了鸡的GHR基因，并对SLD鸡产生的分子基础进行了研究，发现鸡GHR在功能上的缺陷可能是导致性连锁矮小鸡的遗传基础。而最直接的证据来自鸡肝细胞培养实验：对性连锁矮小鸡肝细胞转染介导重组正常的生长激素受体基因后，肝细胞能够正常地响应生长激素的生物功能，类胰岛素生长因子I(IGF-I)的产量显著地增加，这充分地表明肝细胞恢复了对生长激素的结合活性。因此，通常人们认为由dw基因控制的鸡性连锁矮小表型，是由性染色体上的GHR基因的变异引起。GHR 处于GH-GHR-IGF轴上，通过介导生长激素（Growth Hormone，GH）来调控IGF-I的表达，从而在体内起着重要的调节生长发育的作用。鸡的生长激素受体（Chicken Growth Hormone Gene, cGHR）基因在各种组织中都有表达，但在肝脏、肌肉、脂肪等组织中的表达量较高。对成年鸡鸡肝的GHR的RNA进行Northern杂交发现三种转录子，这些不同长度的转录子在不同组织中都有表达。研究认为，表达不同长度的转录子与选择性剪切cGHR基因中3个终止转录的poly(A)信号有关。 

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡矮脚相关的分子检测方法，根据GHR基因突变的特点，通过设计三条引物，对待检个体的目的基因进行扩增，通过琼脂糖凝胶电泳的方法对待检个体进行基因分型。 

本发明的目的是通过以下技术方案来实现： 

一种鸡矮脚相关的分子检测方法，包括以下步骤：

从被检个体的血样中提取DNA；

（2）根据基因序列突变特征设计适当引物，扩增目的基因；

（3）琼脂糖凝胶电泳，进行分型；以及

（4）根据分型结果，判断待检个体是否为有利于育种实践的性连锁矮小个体，其中，性连锁矮小个体扩增产物序列：

Ggtatcaatcttggagcttcaatggcagaaaccccaagtatggaaatgcctgtcccagactacacttctattcatattgttcactctccacaaggccttgtgctcaatgcaaactcagaatgtcattttggtactttactggtcacacaagccattattcgccggtcagaagatgtgtctttcagtttctatttaactttccttatgtcagtgttttgtttgttttcctcgaagtttaataaatgt。

本发明的有益效果为：通过设计三条引物，对待检个体的目的基因进行扩增，通过琼脂糖凝胶电泳的方法对待检个体进行基因分型。 

附图说明

图1是本发明所述一种鸡矮脚相关的分子检测方法的流程图； 

图2是对不同个体进行基因分型的琼脂糖凝胶电泳图，其中1-5为非DW突变个体纯合子；5-10为DW突变纯合子，表型矮脚；11-15为DW突变杂合子。。

具体实施方式

实施例

1.抽取待检个体血样 

样品分别来源于华农畜牧场、湛江遂深家禽有限公司。翅下静脉抽取约0.3ml血液，置于装有70微升抗凝剂的0.5ml的离心管中。

2.DNA的抽提