[发明专利]一种肝纤维化诊断的快速定量试剂盒

权利要求书

1.一种基于上转换发光技术的免疫层析试纸条，包括粘性底衬（5），在粘性底衬（5）的一侧设置分析膜（3），另一侧设置吸水垫（4），分析膜（3）上有结合垫（2），结合垫（2）中有基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1抗体的上转换发光材料（UCP）结合物（6）。

2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于分析膜（3）为硝酸纤维素膜。

3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其中通过所述加样孔，将生物样品添加到结合垫（2）之上的样品垫（1）上；结果判读窗口对应于分析膜（3）上的检测带（7）和质控带（8）；终点指示窗口对应于吸水垫（4）上的终点指示带。

4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，该试纸条用于检测血液样本。

5.一种TIMP-1上转发光定量检测试剂盒，包括权利要求1－4任意一项所述免疫层析试纸条，样本稀释液和样品管。

6.根据权利要求1－4任意一项所述免疫层析试纸条的制造方法，包括以下步骤：

（1）包被

将TIMP-1单抗稀释到2mg/ml，作为T线包被液，将羊抗鼠IgG稀释到2mg/ml，作为C线包被液；通过喷膜机，将T线包被液和C线包被液包被到硝酸纤维素膜上晾干，即获得单克隆抗体包被膜条；

（2）制备UCP标记单抗

a)  称取10 mg UCP颗粒置于锥形瓶中，

b)  加入10 ml pH=7.2 0.20M PB，

c)  在UCP颗粒悬浊液中加入0. 5 mg TIMP-1抗体，再加入无水戊二醛至终浓度1%，37℃搅拌过夜，

d)  12000rpm，4℃，离心15min，弃上清，

e)  UCP沉淀物中加入10ml pH=7.2 0.20M PB，混匀，

f)  12000rpm，4℃，离心15min，弃上清，

g) 收集UCP沉淀物待用；

（3) 制备冻干结合垫 

a)  将50ml UCP标记物悬浊液，12000rpm，4℃，离心30min，弃上清，

b)  加入45ml的冻干液，pH=7.2 0.20M PB，含2%BSA，3%蔗糖，

c)  将UCP标记物悬浊液按5cm2/ml加于玻璃纤维上,

d)  真空冻干11h；

（4）裁剪结合垫；将冻干的结合垫裁剪成1cm宽的长条；

（5）组装试纸条；依次将硝酸纤维素膜、吸水纸、结合垫、样品垫贴到底板上，切成4.0mm宽的纸条。