[发明专利]一种疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的制备方法和应用

权利要求书

1.一种疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1)疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因的合成；

2)疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶表达质粒的构建；

3)里氏木霉的转化与疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶高产菌株的筛选；

4)疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的分离与提纯。

2.如权利要求1所述的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的制备方法，其特征在于，步骤1)中，合成的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因的序列如SEQ ID NO.1所示，合成的基因编码更加符合里氏木霉高效表达的基因编码。

3.如权利要求1所述的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的制备方法，其特征在于，步骤2)具体为：将步骤1)所得的产物由SpeI和XhoI限制性内切酶降解后，用琼脂糖凝胶分离，纯化回收连接，然后通过T4 DNA连接酶连接，转化大肠杆菌DH5α通透细胞，通过分析筛选提取质粒，完成疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶表达质粒的构建。

4.如权利要求1所述的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的制备方法，其特征在于，步骤3)具体为：首先，用EcoRI降解步骤2)构建的质粒形成质粒片段，采用化学转化方法将该质粒片段转入里氏木霉RUT C-30宿主细胞；然后在含有潮霉素B的PDA培养基上培养，再将生长旺盛的菌落接种置PDA培养基上，通过生长和发芽，将孢子再转移到新鲜PDA培养基上，以分离纯化转代稳定的转化子，将这些转化子的孢子接种在木霉纤维素酶诱导培养液，培养后，采样离心，取上清液进行SDS-PAGE电泳分析。

5.如权利要求4所述的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的制备方法，其特征在于，所述木霉纤维素酶诱导培养液的pH值为4.8，用乳糖作为诱导物。

6.如权利要求1所述的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的制备方法，其特征在于，步骤4)完成后，得到的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。

7.一种采用权利要求1-6任一项所述的制备方法制得的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶。

8.一种如权利要求7所述的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在制备面制食品中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述面制食品为馒头。