[发明专利]一种检测黄病毒属病毒的CODEHOP RT-PCR试剂及方法

权利要求书

1.一种检测黄病毒属病毒的CODEHOP RT-PCR试剂，包括上游引物溶液和下游引物溶液，其特征在于所述上游引物溶液含有核苷酸序列为AATGTATGCA GATGATACAG Caggntggga yac的引物B1，所述下游引物溶液含有核苷酸序列为TCTATCATCA ATTGGTTTAA CAACAcartc rtcncc的引物B2；其中r为嘌呤，可以是g或a，y为嘧啶，可以是c或t/u，n是任何碱基，可以是g或a或c或t/u或其它。

2.利用权利要求1所述一种检测黄病毒属病毒的CODEHOP RT-PCR试剂检测黄病毒属病毒的方法，其特征在于步骤如下：

a、RNA提取：用RNA提取试剂盒提取病毒的RNA，得到RNA，具体提取方法依说明书进行； 

b、RNA逆转录：用RNA逆转录试剂盒对上述RNA进行RNA逆转录，得到PCR模板，具体逆转录方法依说明书进行，反应产物即为后续的PCR模板；

c、PCR反应：在0.2mL eppendorf管中加入10×PCR 缓冲液 2.5μL、浓度为25mM的MgCl₂溶液1.5μL、浓度为10mM的dNTP液0.5μL、浓度为5U/μL的Taq酶液 0.5μL、浓度为25μM上游引物溶液1μL、浓度为25μM下游引物溶液1μL，上述PCR模板2μL，灭菌去离子水16μL组成的反应体系；反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃ 延伸1min，45个循环，72℃延伸7min，4℃保存PCR产物，其中上游引物溶液含有核苷酸序列为AATGTATGCA GATGATACAG Caggntggga yac的引物B1，下游引物溶液含有核苷酸序列为TCTATCATCA ATTGGTTTAA CAACAcartc rtcncc的引物B2； 

d、琼脂糖凝胶电泳：将上述PCR产物用重量百分浓度1-1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测目标条带，电泳条件电压100v，30min，将电泳结果用凝胶成像系统分析，若结果出现421~445bp大小片段的条带，则为黄热属病毒。