[发明专利]一种固定化碱性蛋白酶制备大豆多肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于大豆多肽提取加工领域，主要涉及一种固定化碱性蛋白酶制备大豆多肽的方法。

背景技术

大豆肽具有良好的溶解性，在高浓度下黏度低，对热稳定，在酸性条件下不产生沉淀，具有良好的吸湿性与保湿性，具有促进微生物生长代谢等特点，因此可用于生产酸性饮料、营养饮品、高蛋白食品、焙烤食品中，具有软化食品、改善风味、提高产品品质等优点。采用蛋白酶直接在体外进行酶解反应制备肽产品是常用的制肽方法。优点主要是其最佳的温度和pH温和，反应时间及反应程度容易控制，可有效的控制酶解速度，可有效的分裂产生特定的肽。20世纪80年代后，随着发酵工业和基因工程的迅猛发展，酶的制取和提纯工艺日趋成熟，酶的产量和活性也大幅提高，生产成本也急剧降低，此外酶解蛋白质生产的活性肽安全性极高，受到了科研工作者得广泛关注，因此近几年报道的活性肽的制备方法多是酶解法。但是应用蛋白酶直接水解存在不能回收和成本高等缺陷因而在工业上的应用受到了限制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种固定化碱性蛋白酶制备大豆多肽的方法，达到酶制剂可重复回收利用、降低成本、酶解过程连续、不需进行灭酶处理、实现连续化的生产的目的。

本发明的目的是这样实现的：一种固定化碱性蛋白酶制备大豆多肽的方法，所述的方法包括以下步骤：(1)将海藻酸钠溶液与碱性蛋白酶经磁力搅拌1h混匀后，逐滴滴入氯化钙溶液中，形成海藻酸钠固定化碱性蛋白酶，所述的海藻酸钠按重量百分比计，质量分数2.9-3.3％，氯化钙质量分数2.8-3.2％；(2)将海藻酸钠固定化碱性蛋白酶放入填充床反应器中，所述的填充床反应器的填充柱的内径为1.5cm，柱高30cm；(3)利用蠕动泵将大豆分离蛋白溶液注入填充床反应器进行酶解，所述的大豆分离蛋白溶液质量分数为1％，pH为9-10，酶解温度40-60℃，蠕动泵流量500-900ml/h；(4)将酶解液离心，取上清液冻干，得到大豆多肽。

本发明方法利用固定化酶与生物反应器相结合的方法酶解大豆分离蛋白，不仅保留了蛋白酶原有的优点，而且可反复使用，易与反应液分离，避免杂质混入并具有延长酶的使用期和保管期，具有反应条件温和、能耗低、产物性能佳、生产成本低等优点，同时可获得高质量的大豆肽。

附图说明

图1  一种固定化碱性蛋白酶制备大豆多肽的方法工艺路线图；

图2  海藻酸钠浓度对酶活力回收率的影响；

图3  pH对酶活力回收率的影响；

图4  CaCl₂浓度对酶活力回收率的影响；

图5  游离酶添加量对固定化酶活力和回收率的影响；

图6  固定化时间对酶活力回收率的影响；

图7  各影响因素对固定化酶活力回收率的降维分析；

图8  Y＝f(x₁，x₂)的响应面；

图9  Y＝f(x₁，x₄)的响应面；

图10 Y＝f(x₁，x₅)的响应面；

图11 Y＝f(x₃，x₄)的响应面；

图12 pH对大豆分离蛋白水解度的影响；

图13 水解温度对大豆分离蛋白水解度的影响；

图14 底物流速对大豆分离蛋白水解度的影响；

图15 水解时间对大豆分离蛋白水解度的影响；

图16 Y＝f(x₁，x₂)的响应面

图17 Y＝f(x₁，x₃)的响应面；

图18 Y＝f(x₂，x₃)的响应面；

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明。