[发明专利]一种在线快速检测剑麻皂苷的方法

说明书

技术领域

本发明属植物化学、天然产物化学、食品化学、分析化学、有机化学、生物化学、植物次生代谢物质的生理学、植物生物活性物质、剑麻皂苷的提取和纯化及结晶、剑麻的栽培和育种、剑麻皂苷在食品、药品中的安全检测领域，特别涉及一种在线快速检测剑麻皂苷的方法。

背景技术

剑麻皂苷的主要成分是替可吉宁，化学名称是5α，25D-螺甾烷-3β羟基。剑麻皂苷是从生产剑麻纤维传统产品之后废弃的麻汁和麻渣中提取的天然植物皂苷元，是合成甾体激素类药物的医药中间体和重要原料，广泛应用于肾上腺皮质激素、性激素及蛋白同化激素三大类200多种药物的制造。药理研究表明，这些皂苷成分具有较明显的抗炎、抗菌、止血、抗衰老和降血糖的生物活性。

随着人们生活水平的不断提高，天然药物的使用越来越受到人们的青睐。剑麻皂苷的开发利用愈显重要，为了提高皂苷品质，对生产中皂苷含量的检测监控是必不可少的。目前对皂苷的检测方法有：(1)分光光度法(孔燕君，洪美凤2000；鲁敏，李樱红，龚青2009；余佳芮2010)、(2)高压液相色谱(于超，刁长发，夏文娟2000；赖玲，刘华钢等2011；袁春筱，陈志新2011)、(3)薄层扫描法(康阿龙，孙文基等2003；刘婧姝，乔卫2011)、(4)液相质谱联用法(仇峰，陈笑艳，钟大放2003；夏素霞，李国信等2011)、(5)气相色谱法(都述虎，王晓华等2001；夏素霞，李国信等2009)、(6)毛细管电泳法(易润青，叶秀金，宋粉云2011)等。

各种检测方法的优劣分析：薄层色谱法所用的化学试剂比较多；分光光度法和毛细管电泳法检测的步骤多、耗时；高压液相色谱、液相质谱联用和气相色谱的仪器比较贵，同时要有该专业技术人员，一般皂苷加工厂不易实现，另外专用色谱纯的流动相和色谱柱比较贵，生产的成本比较高。这几种方法都适合于大学及研究所对皂苷的研究；相比之下，流动注射化学发光法操作简单，快速，检测成本低，容易克服上述不足，做常规性测定易于被生产厂家所应用。

发明内容

本发明的目的是针对现有检测方法的缺陷，提供一种操作更加简单，检测成本低，标准曲线的线性好的鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测定剑麻皂苷的方法。

具体步骤为：

(1)用0.08～0.12mol/LNaOH作为溶剂配制4.0×10^-5mol/L的鲁米诺，用二次蒸馏水作为溶剂配制3.0×10^-5mol/L的铁氰化钾溶液，用二次蒸馏水为溶剂配制浓度为10mg/mL的皂苷标准溶液和剑麻皂苷样品溶液；

(2)主动泵分别将步骤(1)制备好的载流鲁米诺溶液和皂苷标准溶液以30～60r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪，待基线平稳后，副动泵将步骤(1)制备好的铁氰化钾溶液以50～80r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10～25秒，各液混合，混合液流入流通池检测其化学发光强度，记录数据；水(空白)的发光强度记录为Io，混合液的发光强度记为Is，抑光强度记为ΔI(ΔI＝Io-Is)；作出标准曲线方程：ΔI＝1560.9x+10363，其中x以mg/mL计，浓度在0.001～5mg/ml范围，相关系数R²＝0.9910；

(3)将步骤(1)所得剑麻皂苷样品溶液代替皂苷标准溶液，按照步骤(2)操作过程，计算出抑光强度ΔI，代入标准曲线方程，计算剑麻皂苷样品溶液的含量；

上述测试过程均保持在35℃恒温下进行；上述试剂均为分析纯。

在优化的条件下，剑麻皂苷标准溶液的浓度在0.001～5mg/mL范围内与抑光强度ΔI呈线性关系，这表明可利用这一方法对剑麻皂苷作定量分析。

本发明所述流动注射化学发光法由于其灵敏度高，重复性好，线性范围宽，仪器设备简单，操作简单，检测成本低，可在线进行常规性测定，易于应用到工业或农业生产中。

具体实施方式

实施例：

仪器设备：IFFM-E型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子有限公司)。整个分析过程中采样、注样、实验数据采集及处理，均由Windows XP系统下IFFM-E型流动注射化学发光分析仪完成。

材料与试剂：皂苷标准品(中国药品生物制品检定所)；剑麻皂苷样品(实验室自制)。

具体步骤为：