[发明专利]一种解钾菌及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体地说是一种解钾菌及其制备方法和应用。 

背景技术

现代农业的发展伴随着化肥的大量使用，在增产增收的同时却也导致了土壤板结，有机质含量下降，土壤中的微生物失衡，土壤酸化，重金属含量增加，同时肥料流失还会造成水体污染。目前未见一种农用微生物菌剂系列肥料解钾菌的文献报导和应用，农用微生物菌剂系列肥料不仅可以有效改善土壤品质，同时也可以增强作物的抗性，增加作物对肥料的利用率，减少环境污染，调节土壤中的微生物趋于平衡。 

发明内容

本发明的目的是提供一种解钾菌及其制备方法和应用，解钾菌发酵后可作为新型多功能具有解钾能力的环保生物肥料。 

本发明的解钾菌分类命名为Roseateles  sp.，其保藏登记号为CGMCC No.5856。. 

解钾菌形态特征：在PDA培养基上淡乳黄色圆形菌落，表面及边缘光滑，无隔膜，菌落半透明，较为浓稠。

序列信息：介于Mitsuaria chitosanitabida和Roseateles depolymerans|两个种属之间，与两个种的部分16S rRNA的Blast比对后，相似性均为99%，从进化树的角度看与Roseateles属更为接近。 

解钾菌的制备方法按以下步骤进行： 

1）发酵种子的培养：选取试验室中培养出的纯净、优良的目标菌进行种子罐接种，接种后进行振荡培养或搅拌培养1-3d，菌种浓度达到10¹⁰以上，培养基为：蛋白胨5-15g、牛肉膏3-8g、氯化钠3-8g、水1000ml、pH7.2-7.4；

2）发酵罐及培养基灭菌：先对发酵罐进行灭菌，加入培养基至发酵罐，并对培养基蒸汽灭菌，控制压力0.1-0.15Mpa，温度121-125℃，灭菌20min-30min，自然冷却至30℃，保压，培养基与上述的种子培养基相同；

3）发酵罐接种：在无菌条件下进行接种，将种子液导入发酵罐中，在接种过程中保持发酵罐内正压0.03-0.05Mpa；

4）发酵过程控制：保持温度30℃，发酵罐内压强0.05Mpa，通过温度计及压力表1-2h检测一次温度、压力，通过调节无菌空气加入量调节其溶氧，通过取样口取样检测菌种纯度、含量及pH值；

5）发酵后放料：观察发酵液浓度不再变化，则可以进行放料，放料保持罐内压力0.03-0.06Mpa，放料后产品放置于阴凉干燥处或0-4℃条件下保存。

本发明的解钾菌具有较强的解钾能力，从以下可以验证： 

1、试验室测定菌种解钾能力

试验目的：通过对解钾细菌解钾效果的测定，确定其解钾能力的强弱。

试验原理：采用重量法，将菌种培养前后培养基中的钾长石粉重量进行对比，判定菌种的解钾效果。 

试验步骤及方法 

1、样品处理

a、将保存在斜面上的目的菌种在牛肉膏蛋白胨平板上划线培养，活化3次；

b、将活化好的菌种取一环接种于100ml的牛肉膏蛋白胨液体培养基，30℃，200r/min,摇床培养2天；

c、取3ml菌种培养液，离心取上清液2.5ml(1%的接种量)加入含不溶性钾的250ml钾长石粉液体培养基，27℃，200 r/min,摇床培养4天，设置不加菌种的培养基作为对照，每个处理三个重复；

d、在第二天、第三天、第四天进行测定。

2、重量法测定不溶性钾的分解率 

（1）测定方法

a.钾长石粉称重——培养基中钾长石粉加入量记为m_钾。各瓶的加入量均为1.2500g。

b.滤纸称重——将干燥的定量滤纸放入60℃的烘箱中烘干， 2小时后取出放置在干燥器中冷却，冷却半小时后第一次称重，然后继续烘干半小时，冷却半小时后第二次称重，两次重量之差小于0.0003的可以备用，大于0.0003的继续重复上述的烘干、冷却、称重过程，直至质量差小于0.0003，滤纸质量记为m₁。 

c.过滤——将样品通过滤纸过滤，滤完后清洗三角瓶，把清洗液也并入滤液中进行过滤，再用清水冲洗沉淀物三次，确保沉淀物中基本没有菌种残留。 

d.沉淀烘干——将滤纸连同过滤物放入60℃ 2℃烘箱中烘45分钟。 

e.再次称重——烘干后取出，在干燥器中室温冷却30分钟，称重，质量记为m₂。 

（2）试验结果计算