[发明专利]一种甘薯黑斑病苗期抗性鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种农作物病害抗性鉴定方法，具体的说就是一种甘薯黑斑病苗期抗性鉴定方法，属于农业植物保护领域。

背景技术

甘薯黑斑病是一种主要危害甘薯根系及茎基部的重要真菌病害，世界各甘薯产区均有发生。1937年传入我国，现有26个省、直辖市、自治区发生该病，在甘薯苗床、大田和储藏期均可为害，是我国北方薯区的三大严重病害之一。薯苗受侵染后，在茎部产生凹陷的圆形或梭形小黑斑，后逐渐扩大，环绕薯苗基部呈黑脚状，地上部分叶片发黄或使幼苗基部变黑腐烂。带病薯苗移栽大田1-2星期后，基部叶片发黄脱落，病重时，根部腐烂，仅残存纤维状维管束，薯苗枯死。储藏期薯块受害后，病斑初为黑色小点，逐渐扩大成圆形或梭形病斑，中间产生黑色刺状物，与其他真菌和细菌并发，易引起腐烂。我国每年因该病造成的产量损失在10%左右。

研究表明，抗病品种的选育和推广是控制该病害的主要手段。因此，有效、快速、准确的评价品种抗性显得尤其重要。对甘薯黑斑病的抗性鉴定研究多以薯块为材料，薯苗对黑斑病的抗性鉴定研究则较少。邱瑞镰等（1990）采用大田薯蔓注射针接种鉴定，但由于不同品种间薯蔓长势及木质纤维素含量的不同，易导致结果的误差。

发明内容

    本发明的目的是为克服上述现有技术的不足之处，提供一种甘薯黑斑病苗期抗性鉴定方法。该方法通过将生长一致的甘薯顶尖幼苗去掉下部叶柄后，浸入配制好浓度为1×10⁴个/ml的黑斑病孢子悬浮液中，六天后能快速分辨出不同品种薯苗对黑斑病的抗感程度等步骤，能快速、准确的确定薯苗对黑斑病的抗性程度，具有简便，易学，省时省力等优点，为甘薯抗病育种筛选大批材料提供技术支持。

本发明是以如下技术方案实现的：一种甘薯黑斑病苗期抗性鉴定方法，其特征是：按如下步骤进行：

（1） 病菌分离与培养：从田间采集发病薯块，用真菌分离方法分离出黑斑病菌，在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养7天，备用；

（2） 参试薯苗准备：从苗床或田间剪取6棵生长一致的甘薯顶尖幼苗，视薯苗节间长短以5-6个节间为宜，带回试验室后从叶柄基部剪掉最下面两片叶片，用灭菌水把薯苗茎基部清洗干净，备用；

（3） 接种菌液的配制：将在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上长出的分生孢子用无菌水冲洗下来，用无菌水配制成浓度为1×10⁴个/ml的孢子悬浮液备用；

（4） 接种鉴定：将配制好的孢子悬浮液分装在容量为250ml的无菌三角瓶中，然后将供试薯苗轻放入三角瓶中，每品种3棵，为3次重复，在25-27℃下培养，同时设空白无菌水为对照，三角瓶培养液消耗后用无菌水添加；

（5） 调查评价：6天后调查薯苗水面以下部分黑斑病发病情况，并根据发病程度将薯苗分为0-4级共5个等级，根据受害等级将品种对黑斑病的抗性分为抗病、中抗和感病三个级别；

（6）薯苗受害分级标准：0级：看不到病症；1级：有零星小病斑出现，病斑数≤20个；2级：病斑较大，且病斑数﹥20个，但不连片；3级：病斑较多，且斑点连成片，长度≤2cm；4级：病斑连片，且连片长度﹥2cm；

（7）平均发病级别=（重复I级别+重复Ⅱ级别+重复Ⅲ级别）/3；抗病级别确定：抗病：受害级别≤1.0；中抗：1.0＜受害级别＜3.0；感病：受害级别≥3.0。

本发明的优点是：该方法以苗床或大田薯苗茎尖为材料，室内接种黑斑病菌鉴定抗病性，能够准确、快速、直观的表现出不同品种薯苗对甘薯黑斑病的抗性水平。该方法更接近于田间甘薯幼苗感染黑斑病的实际情况，操作简单、易学，对实验设备要求不高，各育种单位均能开展鉴定工作。该鉴定方法能为甘薯抗病育种前期鉴定提供技术支持，剔除部分感病品种，为后期品种筛选减轻人力、物力。同时，以苗床或大田薯苗茎尖为鉴定材料，能最大限度的减少取材的差异性，降低试验误差。室内灭菌接种，易于试验条件控制，也增强了结果的准确性。该方法的推广使用，对于筛选抗病品种和指导甘薯抗病育种具有重要意义和现实作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明：

实施例、

甘薯黑斑病苗期抗性鉴定方法，我们对苗床采集的13个甘薯品种的薯苗进行黑斑病抗性鉴定试验，按如下步骤进行：

（1）病菌分离与培养：从田间采集发病薯块，用真菌分离方法分离出黑斑病菌，在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养7天，备用；