[发明专利]一种检测膀胱癌相关风险基因的试剂盒

说明书

技术领域

 本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测膀胱癌相关风险基因的试剂盒，通过同时检测与膀胱癌关联的基因MYC和PSCA的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体罹患膀胱癌的风险性。

背景技术

在我国，膀胱肿瘤的发病率居泌尿生殖系统恶性肿瘤的第一位。目前，临床上膀胱肿瘤的治疗多以手术治疗为主，化疗、放射治疗和免疫治疗为辅。但术后具有较高的复发率。化疗药物往往只能延缓肿瘤的复发，对肿瘤的演进作用不大且易产生耐药性和一定的毒、副作用等。因此，寻找更理想的辅助治疗手段越来越受到人们的关注。

前列腺干细胞抗原（PSCA）为一种细胞膜抗原，含123个氨基酸糖蛋白，结构上具有相当数量的Thy-1/Ly-6基因家族特征性的高度保守半胱氨基酸残基、具有一个氨基末端序列、一个羧基末端葡萄糖磷酸肌醇（GPI）锚钉序列和多个糖基化位点。与其干细胞抗原2（SCA-2）具有30%的同源性，后者是依赖于GPI锚钉在细胞表面的Thy-1/Ly-6家族抗原成员之一。同干细胞抗原一样，PSCA抗原依赖GPI结合于细胞膜上，并可被GPI特异磷酸酯酶所清除。依赖糖基磷酸酰肌醇结合于细胞膜的抗原被认为含有丰富的微观区域，该微观区域在信号传导及分子传输中起重要作用。PSCA物理图谱定位于染色体8q24.2，人SCA-2和Ly-6家族抗原也都定位于此区域，提示该区域含有大量的相关基因家族。而大多数进展和复发的前列腺癌在此区域存在等位基因获取或扩增现象。与原发性前列腺和转移性前列腺癌密切相关的癌基因c-myc也定位于染色体8q24近端，研究表明前列腺癌中PSCA和c-myc存在着过度表达。

研究人员采用免疫组化和Northern blot分析方法分析PSCA在正常及泌尿系统恶性上皮组织中的表达。发现在正常膀胱组织中，PSCA仅局限在浅表的伞状细胞层并呈弱阳性表达，而在21例原位膀胱肿瘤（CIS）和38例浅表性膀胱癌（STCC）较正常膀胱上皮明显表达增强，分别为100%（21/21）和97%（37/38），在65例侵犯肌层的膀胱癌（ITCCs）与7例转移性膀胱癌分别为65%（42/65）与57%（4/7）呈阳性表达，且两者中分别有32%和43%呈强阳性表达，且PSCA的表达水平随着肿瘤的分级呈现正相关（p＜0.001 ）。共聚焦显微镜显示在移行细胞癌PSCA表达定位于细胞表面。同时也发现在正常的膀胱PSCA表达局限在伞细胞层。PSCA的表达可能与肿瘤细胞分化程度有关，PSCA的表达可能与肿瘤细胞分化程度有关，PSCA的表达丧失可使细胞间失去黏附，更有利于肿瘤的浸润转移。

另外，研究人员证实低水平的MYC扩增是无肌层侵犯和肌层侵犯膀胱癌的共同特征，并且与肿瘤恶性分级相关。过去的研究发现染色体8q扩增可导致MYC基因的过表达，已经证实PSCA基因位于染色体8q上的MYC癌基因的远端，对膀胱癌的原位荧光检查可区分是否由基因扩增引起的PSCA的过度表达，而且还可确定PSCA的过度表达是否与MYC扩增有关。

C-myc基因是最早发现的原癌基因之一，定位于人类染色体8q24区带上，编码一个类丝氨酸、苏氨酸、磷酸化的蛋白质，由于分布于细胞核内，推测可能具有结合DNA的能力。大量实验已证实C-myc基因在细胞增殖过程中起重要作用，在细胞分裂周期中C-myc基因表达增加，尤其以G1期进入S期中最为明显。提高C-myc基因的表达对细胞从G1到S期是极为重要的，并可使原代细胞获得“不死性”，这种细胞具有无限生长的能力，但同时C-myc也参与细胞凋亡过程。研究人员发现在某些因素引起细胞增殖停滞时，C-myc基因的持续表达可促进细胞凋亡。目前对C-myc基因作用的一致的结论是，当环境中存在生长刺激因素时，如表皮生长因子的存在，能促进细胞增殖及转化，当缺乏生长刺激信号时，则诱发细胞凋亡。