[发明专利]一种苹果种质资源条形码标识的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及果树种质资源识别技术，具体地说是一种苹果种质资源条形码标识的制备方法。

背景技术

苹果属(Malus Mill.)种质资源丰富，品种类型多样，包括大量的野生种、半野生种及栽培品种。中国是世界上苹果种质资源重要的起源中心之一，种质资源极其丰富，原产中国的苹果有24个种，其种下变种、变型更是多样。除野生种外，苹果资源个体差异不甚明显，加之各地交流频繁，造成同物异名、同名异物现象普遍。苹果种质资源的准确鉴定是种质资源保存和利用的前提，目前苹果种质资源的鉴定方法以往主要是形态学观察、同工酶等方法。随着分子标记技术的发展，分子标记技术越来越多的被应用到苹果种质资源的鉴定评价中。

自Litt和Luty首次将SSR技术(simple sequence repeat，即简单序列重复，又称微卫星)用于进行人类遗传学研究以来，SSR技术因多态性高、分布广、重复性好、共显性以及成本较低等优点而被广泛应用，也因此被应用到苹果种质资源的鉴定中。但是利用SSR分子标记对苹果基因组DNA扩增获得的鉴定数据比较抽象而分散，且不利于在生产或科研中直接应用。

发明内容

为了能够利用SSR分子标记数据获得苹果种质资源条形码标识，本发明提出了一种苹果种质资源条形码标识的制备方法。该方法利用SSR引物对苹果种质资源的基因组DNA进行扩增，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，通过数据分析获得0或1数据，将所有SSR位点获得的0或1数据按序排列，利用条形码生成软件，生成每份苹果种质资源独特的、并且在生产或科研中可以直接利用的条形码标识，解决苹果种质资源识别的技术问题。

本发明解决技术问题所采用的方案是：

提取苹果种质资源的基因组DNA，挑选多态性好的SSR分子标记引物，对苹果种质资源的DNA进行PCR，即聚合酶链式反应，扩增，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR产物，获得鉴定图谱，通过数据分析获得0或1数据，将所有SSR位点获得的0或1数据按序排列，利用条形码生成软件，生成每份苹果种质资源独特的条形码标识。

积极效果：本发明方法能够将SSR分子标记对苹果种质资源的鉴定数据生成简单可用的条形码标识，使之便于识别，具有稳定性好、结果可靠，实用性强的优点。适宜在生产、科研或苹果品种选育中应用。

附图说明

图1为本发明条形码数据排列图

条形码具有等高不等宽的标志线，下部为基因组数据0或1的编码。

具体实施方式

SSR引物的PCR扩增：提取高质量的苹果种质资源的基因组DNA，挑选多态性好的SSR分子标记引物，利用20μl反应体系（含20～40ng基因组DNA，Tris–HCl10 mmol/L (25℃，pH9.0) ,KCl 50mmol/L，MgCL21.5mmol/L，dNTP0.2 mmol/L，引物0.5μmol/L，Tag聚合酶1U），在PCR仪上对苹果种质资源的基因组DNA进行扩增。

电泳检测与数据分析：利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对每对SSR引物对苹果种质资源基因组DNA的扩增产物进行检测，获得凝胶电泳图谱，通过数据统计分析获得0或1数据。

条形码生成：将所有SSR位点获得的0或1数据按序排列，利用条形码生成软件，生成每份苹果种质资源独特的条形码标识。

实施例

据图1所示，以41份苹果材料作为试材，利用SSR引物，在58℃条件下退火进行PCR扩增，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对PCR产物进行电泳处理，获取鉴定图谱，根据图谱确定等位基因数据。利用5对SSR引物即可鉴定区分全部供试的苹果种质资源材料，将获得的5个SSR位点的等位基因数据转化为0或1数据，利用条形码技术，将41份苹果种质资源材料在5个SSR位点的特异数据转化成每份材料独特的条形码标识。以其中的富士苹果为例说明条形码的生成过程：

富士苹果在5个SSR位点的等位基因数据见表1。

表1 富士苹果在5个SSR位点的等位基因数据