[发明专利]获得叶用莴苣的聚类分析图的方法、引物组合及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种获得叶用莴苣的聚类分析图的方法、引物组合及应用。 

背景技术

目前，我国国家蔬菜种质资源库收集和保存叶用莴苣种质资源200余份，但目前生产上使用的栽培品种多数引自国外。叶用莴苣是一种低投入、高收益、营养价值丰富的速生蔬菜，近年来栽培面积迅速扩大，逐渐成为人们食用的首选绿叶蔬菜之一。但是，我国叶用莴苣的栽培品种主要靠引进国外已有品种，具有自主知识产权的品种和类型很有限，并且在品种资源搜集、鉴定上几乎是空白。因此，需要多角度、多方法开展种质资源的创新工作，开发出品质优良的叶用莴苣新品种，来满足当前生产的需要。种质资源是蔬菜遗传育种和品种改良的基本材料，种质资源的鉴定和筛选是培育和改良优异品种的一项基础工作。由于不同地区之间频繁引种，使得品种名称十分混乱，同物异名和同名异物的现象非常普遍。所以，鉴定叶用莴苣种质资源遗传多样性和亲缘关系中的有效性，能为叶用莴苣种质资源的收集、保存、利用提供理论依据。 

现阶段，对于蔬菜的种质资源鉴定，大多用的基于PCR技术的DNA标记技术，可综合为三大类： 

一是以分子杂交为基础的标记技术，主要是RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)及VNTR(Variable number tandem repeat)； 

二是以PCR为基础的标记技术，如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、SCAR(Sequence Characterized Amplified Regions)、STS(Sequence Tagged Site)、SSR(Simple Sequence Repeat)、ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)、DAF(DNA Amplified Fingerprinting)及ERPAR(Ex-tended Random Primer Amplified Regions)等； 

三是酶切和PCR相结合的标记技术，主要有AFLP(Amplified ragment Length Polymorphism)和CAPS(Cleaved Amplified Polymorphic Sequence)。此外，还有一类新近发展起来的基于单个核苷酸多态性的DNA标记，即SNP(Simple Nucleotide Polymorphism)。随着逆转座子研究，一项基于反转录转座子的植物分子标记技术-RTN技 术得到了很大的发展，主要有SSAP(Sequence-l Variation Polymorphism)、RIAP(Inverse Retrotransposon Amplified Polymorphism)、RBIP(Retrotransposon based Insertion Polymorphism)等5种。选择何种方法对叶用莴苣种质资源遗传多样性和亲缘关系进行鉴定是急需解决的问题。 

发明内容

本发明实施方式提供一种获得叶用莴苣的聚类分析图的方法、引物组合及应用，可以解决目前不能对叶用莴苣种质资源遗传多样性和亲缘关系进行有效鉴定的问题。 

解决上述技术问题的技术方案如下： 

本发明实施方式提供一种获得叶用莴苣的聚类分析图的引物组合，其为以下引物组合中的任一组： 

E39/M58、E40/M55、E41/M56、E50/M78、E75/M65、E75/M66、E75/M64、E76/M64、E78/M65或E75/M63。 

本发明实施方式还提供一种获得叶用莴苣的聚类分析图的方法，该方法包括： 

以叶用莴苣的基因组DNA为模板，用上述的引物进行PCR扩增得到扩增产物； 

将上述步骤得到的所述扩增产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离DNA标记，用银染显色法显示DNA条带； 

选取电泳平板上清晰可辨的电泳条带，采用非加权组平均法进行聚类分析得出聚类分析图。 

本发明实施方式进一步提供一种上述的引物组合在获得叶用莴苣的聚类分析图中的应用。 

本发明实施方式又提供一种叶用莴苣的聚类分析图，利用上述的方法获得。