[发明专利]一种检测巯基化合物的荧光探针及其制备方法与使用方法

权利要求书

1. 一种检测巯基化合物的荧光探针制备方法，其特征在于：该检测生物巯基的荧光探针有两部分组成：2,4-二硝基苯磺酰基为识别基团，丹磺酰氯衍生物为信息报告功能团，其结构如式I；

检测生物巯基的荧光探针的制备路线如下：

检测巯基化合物的荧光探针的制备方法，包括以下步骤，

步骤一，式II的制备：将0.2～0.4 g对苯二酚溶于50 mL 的二氯甲烷中，再加入0.6 mL三乙胺，0℃条件下加入0.6～1.2 g丹磺酰氯，然后在室温下搅拌反应10～15小时，待反应结束后，蒸干溶剂，以硅胶柱进行分离；

步骤二，式I的制备：将0.6～1.2 g式II化合物溶于50 mL二氯甲烷中，并加入1.5 mL三乙胺,搅拌5分钟后,向反应体系内滴加溶有0.9～1.8 g 2,4-二硝基苯磺酰氯的二氯甲烷溶液10 mL，待滴加完全后，室温继续搅拌10～15小时，减压除溶剂，粗产品用硅胶柱层析进行分离纯化，以石油醚：乙酸乙酯= 4：1为洗脱剂洗脱，得到探针分子纯品。

2.一种检测生物巯基的荧光探针的使用方法包括以下步骤：

步骤一，测量探针分子的核磁共振波谱

步骤二，测定探针分子对巯基的选择性

将探针分子以少量DMSO溶解，再用无水乙醇配置成溶液；分别加入以无水乙醇溶解的待测样品，使最终探针分子的浓度为0.1 mM，而待测样品的浓度为5 mM；反应2小时后在荧光光谱仪上进行测定，进而确定探针分子对巯基的选择性；

步骤三，测定探针分子对硫代乙醇酸的荧光-浓度曲线

将探针分子以少量DMSO溶解，再用无水乙醇配置成溶液；分别加入不同浓度的硫代乙醇酸，使最终探针分子的浓度为0.1 mM；反应2小时后在荧光光谱仪上进行测定，进而得到荧光强度对浓度变化的曲线；

步骤四，测定探针分子对硫代乙醇酸的荧光-时间曲线

将探针分子以少量DMSO溶解，再用无水乙醇配置成溶液；加入硫代乙醇酸，使最终探针分子的浓度为0.1 mM，而硫代乙醇酸的浓度为5 mM；反应一定时间，检测荧光强度，进而得到荧光强度对时间变化的曲线。