[发明专利]一种萝卜为原料制作适宜恶疫霉菌产生孢子囊的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及植物保护领域中一种植物病原菌恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)产孢子囊的培养基。

背景技术

恶疫霉(Phytophthora cactorum Schroet)，属卵菌门疫霉属病原菌，是全世界范围内广泛分布的重要植物病原菌，能侵染约60个科、50个属中的约200种植物。恶疫霉菌通常以菌丝体和卵孢子在病残体和土壤中越冬。翌年条件适合时菌丝直接侵染寄住，或形成大量游动孢子囊传播到地上部侵染茎叶。孢子囊在该病的传播和蔓延中起着非常重要的作用。通常，在室内进行致病力测定或其它相关生物学特性研究均需要制备孢子悬浮液。目前，诱导恶疫霉产生孢子囊的方法主要采用菌丝水培法，主要方式有(1)将培养好的菌丝体置于装有消毒土壤浸出液或灭菌蒸馏水的皮氏培养液中，再将培养皿置于荧光灯下照射3天，每天振荡皿液3次，第三次补充液体，并在8℃下培养2小时使游动孢子释放。(2)从菌落边缘切取菌丝块放入15ml 10％V6培养液的培养皿中，置于25℃、黑暗中培养3d，然后将菌丝挑入倒有15ml灭菌蒸馏水的培养皿内，置于25℃下光照3d，每天换水1次。孢子囊产生后将盛有大量孢子囊的培养皿放入4℃冰箱中15min后，移至25℃下静置20min，诱使大量游动孢子产生。各种水培法在实施过程中试验步骤较多，稍微操作不当就会被杂菌污染，影响试验进程。因此，迫切需要一种筛选出一种培养基，使恶疫霉能在该培养基上产生大量孢子囊用于相关研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种使恶疫霉菌产生孢子囊的培养基。本发明克服了目前利用恶疫霉菌菌丝水培法诱导产生孢子囊容易被杂菌污染的缺点，提供了一种直接在培养基上培养产生孢子囊的方法。

本发明的技术方案是利用萝卜(Raphanus sativus L.)为原料制作培养基用于恶疫霉产生孢子囊。

以萝卜为原料制作适宜恶疫霉菌产生孢子囊的培养基，具体制作方法为，取100-200克萝卜，切碎后于0.5L水中煮沸30分钟过滤，滤液中加入15g琼脂，加热使琼脂融化后定容至1升，分装后以0.103MPa、121C、高压蒸气灭菌20min；将灭菌培养基到入灭菌的9cm直径培养皿中制成平板，冷却后用直径5mm的打孔器在已培养3d的菌落边缘打取菌块接种于培养基上。将接种后的培养皿置于25℃下黑暗培养10天后便产生大量孢子囊。

本发明的有益效果是：直接在萝卜培养基上培养就能产生大量孢子囊，减少了利用水培法诱导产生孢子囊的操作过程中污染的几率。另外，该培养基原材料成本低廉且容易获取，培养基的制作和孢子囊产生的程序简单易学，且这种方法可以用于孢子囊形态的鉴定、恶疫霉菌致病力测定或抗药性突变体筛选中孢子悬浮液的制备等相关的研究，具有较高的实际应用价值。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

实施例一：萝卜琼脂培养基与其它培养基产孢子囊能力差异比较

1、培养基制作：

(1)萝卜培养基(100g/L)：取100g萝卜，切碎后于0.5L水中煮沸30分钟过滤，滤液中加入15g琼脂粉，加热使琼脂融化后定容至1升。

(2)萝卜培养基(150g/L)：取150g萝卜，切碎后于0.5L水中煮沸30分钟过滤，滤液中加入15g琼脂粉，加热使琼脂融化后定溶至1升。

(3)萝卜培养基(200g/L)：取200g萝卜，切碎后于0.5L水中煮沸30分钟过滤，滤液中加入15g琼脂粉，加热使琼脂融化后定溶至1升。

(4)白云豆培养基：白云豆粉60g，于0.5L水中煮沸30分钟过滤，滤液中加入15g琼脂粉，加热使琼脂融化后蒸馏水定容至1L。

(5)胡萝卜培养基(CA)培养基：取胡萝卜200g，于0.5L水中煮沸30分钟过滤，滤液中加入15g琼脂粉，加热使琼脂融化后蒸馏水定容至1L。

(6)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：取马铃薯200g，于0.5L水中煮沸30分钟过滤，滤液中加入葡萄糖6g、琼脂粉15g，蒸馏水定容至1L。

将上述培养基分别分装后于0.103MPa，121℃，高压蒸气灭菌20min。冷却至50℃左右制作培养基平板。

2、不同培养基产孢能力差异测定