[发明专利]一种膜培养筛选鸟苷高产菌的方法

权利要求书

1.一种膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，包括有以下步骤：

1）将待筛选和复壮的鸟苷生产菌加入灭菌蒸馏水，置振荡器上，混合均匀，制成稀释度为10^-2-10^-7的菌悬液；

2）将菌悬液接种至膜培养系统中，静置培养；

3）根据膜培养系统中鸟苷生产菌的菌落大小和形态进行判断，初筛出鸟苷高产菌株和负变菌株。

2.根据权利要求1中所述膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于所述的膜培养系统由三部分组成，培养皿的底层为步骤1）所述的菌悬液混匀的营养成分不丰富的琼脂培养基，中层为微孔滤膜，上层为浸润了营养丰富的培养液的灭菌滤纸。

3.根据权利要求2中所述膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于所述的微孔滤膜孔径为0.02μm，直径为ψ85mm的聚碳酸酯微孔滤膜。

4.根据权利要求2或3中所述膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于所述的营养成分不丰富的琼脂培养基为：双酶糖30±5 g/L ，蛋白胨1±0.5 g/L ，磷酸二氢钾4±0.5 g/L，硫酸铵6±2g/L，氯化钠1±0.5 g/L，碳酸钙20±5 g/L和硫酸镁3±2 g/L。

5.根据权利要求2或3中所述一种膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于所述的营养成分丰富的的培养液为：酵母粉35±5 g/L，酵母膏10±5 g/L和玉米浆10±2 g/L。

6.根据权利要求1中所述膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于静置培养条件为：28℃-38℃，培养时间为30 h-44 h。

7.根据权利要求2中所述膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于膜培养系统的制备方法为：待培养皿的底层的营养成分不丰富的琼脂培养基凝固，培养6 h-8 h后，在其上置一层灭菌的聚碳酸酯微孔滤膜，其上层再布置浸润了营养丰富的培养液的灭菌滤纸，于28℃ -38℃继续培养22 h-36 h。

8.根据权利要求1中所述膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于步骤3）中的判断方法是：膜培养系统中同样条件下生长快，菌落大而润泽的单菌落，为负变菌株，产苷量较低；生长较慢，菌落小而干燥的单菌落，为高产菌株。

9.根据权利要求8中所述膜培养筛选鸟苷高产菌的方法，其特征在于初筛后还包括进一步复筛，通过将筛选出的高产菌株和负变菌株接入摇瓶，28℃-38℃，转速200 rpm-300 rpm，培养30 h-48 h，取离心后，清液采用HPLC法，准确测定鸟苷的产量。