[发明专利]一种动物病毒的纯化工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物病毒的纯化工艺。

背景技术

近年来，动物病毒性传染病(如禽流感、口蹄疫和PRRS等)相继爆发并流行，引起动物大规模的死亡，造成了巨大的经济损失。疫苗接种是现阶段我国防控动物疫病的最有效技术手段，在畜牧业的发展中发挥着越来越重要的作用，极大地促进了动物养殖业的繁荣发展。

目前，动物用疫苗可分为常规疫苗和基因工程疫苗两大类。根据制备工艺和组成成分的不同，常规疫苗可分为灭活疫苗、弱毒活疫苗、单苗、多价(联)疫苗等。随着分子生物学、分子免疫学、分子遗传学的研究取得进展与基因工程技术的应用，又出现了基因工程疫苗，主要包括亚单位疫苗、合成肽苗、抗独特型抗体疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫苗以及核酸疫苗等。但目前生产实践中大量应用的疫苗仍以常规疫苗为主。

动物疫苗同人类的疫苗一样，是保证动物健康的必不可少的措施。但是由于动物疫苗的成本偏低，所以其疫苗生产技术和工艺的发展相对滞后。现有动物疫苗的问题之一就是病毒抗原纯度不高，导致疫苗的副反应大、免疫效果不够确实。原因在于疫苗的生产工艺相对落后，缺乏足够的纯化步骤，不能提供高效、高纯的病毒抗原。

发明内容

本发明的目的是提供一种动物病毒的纯化工艺。

本发明提供了一种动物病毒的纯化方法，是将动物病毒液依次进行离心、超滤、和分子筛层析，得到纯化的病毒液。

所述方法可包括如下步骤：

(1)将动物病毒液离心收集上清液；

(2)将步骤(1)得到的上清液进行超滤浓缩，得到病毒浓缩液；

(3)将步骤(2)得到的病毒浓缩液进行分子筛层析，得到纯化的病毒液。

所述动物病毒液的制备方法具体如下：将动物病毒接种动物细胞并培养，得到病毒液。

所述动物病毒可为水貂肠炎病毒，具体可为MEVB毒株。

所述动物细胞可为F81细胞。所述接种的剂量可为MOI＝0.05-0.15，所述培养的条件可为37℃、96-120小时。所述接种的剂量具体可为MOI＝0.1，所述培养的时间具体可为96小时。

所述步骤(1)中，所述离心的条件可为4℃、8000-12000g、15-20分钟。所述步骤(1)中，所述离心的条件具体可为4℃、10000g、18分钟。

所述步骤(2)中，所述超滤浓缩的方法可为：将30-50体积份所述上清液用截留分子量为30kD的超滤膜包浓缩至1体积份。所述步骤(2)中，所述超滤的方法具体可为：将50体积份所述上清液用截留分子量为30kD的超滤膜包浓缩至1体积份。

所述步骤(3)中，所述分子筛层析的参数可如下：

层析柱型号为：Index Column 100/950；

填充介质为：Sepharose 4 Fast Flow；

洗脱液为：pH7.4-7.8、0.04mol/L的PBS缓冲液；

收集第一个洗脱峰，即为纯化的病毒液。

所述步骤(3)中，所述洗脱液具体可为pH7.6、0.04mol/L的PBS缓冲液。

所述分子筛层析中，可采用8％柱体积的上样量。

所述分子筛层析中，所述洗脱液的流速可为200ml/min。

以上任一所述方法制备得到的纯化的病毒液均属于本发明的保护范围。

所述纯化的病毒液可用于制备动物疫苗。

本发明以水貂肠炎病毒(MEV)为研究对象，针对我国动物疫苗产业关键生产技术薄弱环节，结合重大动物疫病及人畜共患病防疫的迫切需求，将离心技术、超滤浓缩分离技术和分子筛技术有机地结合在一起，建立了病毒抗原规模化浓缩纯化工艺和适合规模化抗原浓缩纯化的生产线，最终为研制安全高效的疫苗产品打下良好基础。本发明很好地解决了疫苗生产过程中的共性关键技术和生产工艺技术的难点问题，突破了影响动物疫苗生产过程中的关键技术环节的瓶颈，建立了疫苗工业化生产关键技术及相关技术研究及产业化平台。本发明将带动动物疫苗产业技术进步和产品更新换代，提高动物疫苗生产技术水平和产品质量，提升我国动物疫苗的核心竞争力，切实提高动物福利，并最终为人类的健康提供保障。

附图说明

图1为病毒浓缩液进行分子筛层析的图谱。

具体实施方式