[发明专利]6-(甲巯基)嘌呤免疫原和6-(甲巯基)嘌呤检测试剂有效
申请号: | 201210089894.7 | 申请日: | 2012-03-30 |
公开(公告)号: | CN102643341A | 公开(公告)日: | 2012-08-22 |
发明(设计)人: | 虞留明;田军;袁红霞;蔡江丽 | 申请(专利权)人: | 苏州博源医疗科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765;C07K14/795;C07K14/47;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/532;G01N33/535;G01N33/543 |
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地址: | 215000 江苏省苏州*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 巯基 嘌呤 免疫原 检测 试剂 | ||
1.一种6-(甲巯基)嘌呤免疫原,其特征在于结构式如式(Ⅰ)所示:
式中,R为连接基团,载体具有免疫原性。
2.根据权利要求1所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原,其特征在于R选自-(CH2)n-COO-、-O-(CH2)n-COO-、-S-(CH2)n-COO-或-NH-(CH2)n-COO-中的一种,n是1至20之间的整数,优选n值为1至10。
3.根据权利要求2所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原,其特征在于R为-(CH2)5-COO-。
4.根据权利要求1所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原,其特征在于载体为具有免疫原性的蛋白质,选自血清蛋白,血蓝蛋白或甲状腺球蛋白中的一种,优选为牛血清蛋白。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原的制备方法,其特征在于包含以下步骤:
(1)用10-100ml有机溶剂A溶解1.0-10.0g的6-MMP和1.0-5.0g的碳酸盐,得到溶液1;将1.0-5.0g的6-溴己酸乙脂加入到5-50ml的有机溶剂A中,得到溶液2,将溶液1和2合并进行搅拌反应。将反应后的溶液用无机酸溶液中和,经有机溶剂B萃取分离后纯化、干燥,得到白色固体状6-(甲巯基)嘌呤衍生物。
(2)将具有免疫原性的蛋白质100-300mg溶于10-100ml的0.2M,pH 8.5磷酸盐缓冲液中。
(3)用1.0-5.0ml的有机溶剂A溶解50-500mg的6-(甲巯基)嘌呤衍生物,通过1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺进行活化并与载体溶液进行交联反应,经透析纯化后得到具有免疫原性的6-(甲巯基)嘌呤免疫原,
所述的有机溶剂A选自二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、甲醇或乙醇中的一种,优选为二甲基甲酰胺;
所述的有机溶剂B选自乙酸乙酯,乙醚或氯仿中的一种,优选为乙酸乙酯,
所述的碳酸盐为Na2CO3或K2CO3,优选为Na2CO3;
所述的无机酸溶液为盐酸溶液或硫酸溶液,优选为盐酸溶液。
6.一种抗6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体,由权利要求1~5任意一项所述的6-(甲巯基)嘌呤免疫原免疫宿主动物后生产得到。
7.根据权利要求6所述的6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体,其特征在于所述的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体,优选为多克隆抗体。
8.根据权利要求7所述的6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体,其特征在于所述的宿主动物选自家兔,山羊,小鼠,绵羊,豚鼠或马中的一种,优选为家兔。
9.一种如权利要求6-8中任一项所述的6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体的制备方法,其特征在于包含以下步骤:
(1)用磷酸盐缓冲液将合成的6-(甲巯基)嘌呤免疫原稀释至0.5-5.0mg/mL;
(2)经常规弗氏佐剂法对动物进行注射,注射后抽取动物特异抗血清,得到有效的抗体。
10.一种6-(甲巯基)嘌呤检测试剂,含有权利要求6-8所述的抗6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体和指示试剂,所述的指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、荧光试剂或化学发光试剂中的一种。
11.根据权利要求10所述的6-(甲巯基)嘌呤检测试剂,其特征在于所述的指示试剂为酶试剂,由6-(甲巯基)嘌呤酶标偶联物和酶底物所组成。
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