[发明专利]一种三联免疫胶体金速测卡及其制备、使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物工程技术领域的速测卡及其使用方法，具体是一种同时检测瘦肉精(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇)的三联免疫胶体金速测卡及其使用方法。 

背景技术

盐酸克伦特罗(Clenbuterol)、莱克多巴胺(Ractopamine)、沙丁胺醇(Salbutamol)等β-肾上腺素受体激动剂由于能促进畜禽的生长，而后曾用于畜禽饲料添加剂，因为畜禽食用后在代谢过程中能够促进蛋白质的合成以及脂肪的降解，提高畜禽的瘦肉率。20世纪90年代，我国错误地将其作为科研成果开始以饲料添加剂引人并推广，被俗称为“瘦肉精”。该药易在畜禽体内特别是内脏中残留，特别是肺、肝、肾等内脏里，并通过食物链进入人体，其累积性残留随剂量和时间而增大；而且化学性质稳定，加热到172℃时才分解。因此，一般的烹调加热方法不能将其破坏掉。人食用含“瘦肉精”残留量高的肉制品和内脏后，就会引起中毒，出现全身肌肉颤抖、头晕、呕吐等中毒症状，严重危害人类健康，特别对于患有高血压、心脏病的人来说危险性就更大，直接危及生命安全。 

特别地，自从2011“双汇瘦肉精”事件爆发以来，全国范围内的猪肉制品都受到了不同程度地冲击，这不仅损害了消费者的权益，扰乱了社会的公信度，对我国食品安全整体形象也造成了极其恶劣的影响。 

目前，市场上检出的“瘦肉精”类违禁药物残留主要为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇以及三种物质。据统计，我国2010年生猪存栏量为4.8亿头左 右，出栏量为一亿头左右。对如此庞大数目的生猪养殖场、屠宰场等进行“瘦肉精”检测成了一项浩大的工程。一般常规的金标卡仅仅能一次检测一种“瘦肉精”类型，这严重阻碍了基层食品安全检测部门的大范围筛查。本发明提供了一种快速、现场、灵敏的检测三种主要“瘦肉精”违禁药物残留的方法，可以在同一条检测卡上同时检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇，为“瘦肉精”类违禁药物残留的快速筛查提供了一种低成本、高效的途径。 

以侧向流动为检测原理的金标卡检测方法已在我国畜禽产品检测实践中广泛应用。但未见针对同时检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等的快速检测试纸条的公开报道。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种制备同时检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺以及沙丁胺醇的金标卡检测方法，并应用其针对尿样、组织类等样品中“瘦肉精”类违禁药物残留的快速、现场和灵敏的检测。 

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明的制备方法包括以下步骤： 

1)在上层的塑料板有两个的孔，分别为加样孔和观察孔，加样孔大小为3mm×7mm，观察孔大小为4mm×18mm。 

2)在塑料板下方从加样孔往上依次为并排粘贴的玻璃纤维膜和的固定有胶体金标记抗体的试纸条、NC膜、吸收垫。玻璃纤维膜大小为4mm×15mm；金标记抗体试纸条大小为3mm×4mm；NC膜大小为4mm×28mm；吸收垫大小为4mm×19mm。 

3)金标垫上每种单克隆抗体的量为5ng-50ng；NC膜上抗原-BSA的量为0.4μg-1.2μg。 

4)试纸条干燥温度为37℃，时间为30min。 

本发明上述方法制备的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三联速测卡，实际猪尿和饲料样品以及肉样的快速检测具体步骤如下：首先于加样孔中加入50μL样品溶液并水平放置。样品溶液会沿样品垫渗透至胶体金标记抗体的试纸条，并与NC膜上的特异性抗原竞争结合试纸条上固定的特异性单克隆抗体。8-10min后，于结果观察孔中观察颜色变化，作出判断。 

结果判断：完全阴性结果(出现1条C线+3条CLE/SAL/RAC的T线；阳性(+)：只要任何一条盐酸克伦特罗CLE/莱克多巴胺RAC/沙丁胺醇SAL的T线显色不明显或无显色。 

本发明制得的新型瘦肉精三联速测卡对猪肉制品、饲料样品以及尿样中的复杂基质具有较好的抗干扰效果，可广泛应用于三种“瘦肉精”违禁药物残留的快速检测。较现有的速测卡操作相此，具有以下特有优势。 

(1)同一张卡上能同时检测克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三种“瘦肉精”类残留，而不是三张单种卡的简单物理性胶连，加样仅需1次，而且反应均在同一条件下进行。 

(2)样品前处理完全统一(克服了组织类样品检测中的不同处理方法)，操作简单，50微升样品加样量即可。通常地，克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇单种卡在检测组织类样本时，样品前处理的程序是不一样的；如单种依次处理，存在时间长、操作繁琐等缺陷。