[发明专利]胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒及其制备工艺

权利要求书

1.一种胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上，其特征在于，所述致敏乳胶聚酯膜上包被有彩色乳胶颗粒标记的抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I，免疫硝酸纤维素膜上设有包被了抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体II的检测线和包被了羊抗兔IgG的质控线。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述彩色乳胶颗粒为粒径280～310nm的聚苯乙烯颗粒。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I是以融合蛋白Ure-BA为抗原物质，免疫动物制备获得的多克隆抗体，所述融合蛋白Ure-BA序列见SEQ ID NO：5。

4.权利要求1-3任一权利要求所述的胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1)致敏乳胶颗粒的制备：用羧基化的聚苯乙烯标记抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I，获得致敏乳胶颗粒；

2)致敏乳胶聚酯膜的制备：用步骤1)获得的致敏乳胶颗粒包被聚酯膜，获得致敏乳胶聚酯膜；

3)将抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体II和羊抗兔抗体分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；

4)将滤样纸、致敏乳胶聚酯膜、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC片上，切裁制得试剂条；

5)将试剂条装入塑料盒，获得胃幽门螺旋杆菌乳胶法检测试剂盒。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)致敏乳胶颗粒的制备为：

a.取一定体积的羧基化的聚苯乙烯，用2～3倍体积20mM pH 6.0的碳酸缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀；

b.用1～1.5倍体积20mM pH6.0的磷酸缓冲溶液悬浮上一步获得的羧基化的聚苯乙烯颗粒沉淀，并加入1～1.5倍体积的水溶性炭化二亚胺，室温下搅拌15～40分钟，最后用2～3倍体积0.01M pH 8.0的硼酸缓冲溶液多次冲洗、离心、弃上清，获得待标记物；

c.向步骤b获得的所述待标记物中加入2～3倍体积0.2M pH 7.0的硼酸缓冲液制成乳胶悬液，并向所述乳胶悬液中加入抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I；

d.充分反应过夜，加入终止剂终止反应，获得致敏乳胶颗粒。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中碳酸缓冲溶液为20mM pH 6.0含0.01％SDS的碳酸缓冲溶液。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中羧基化的聚苯乙烯浓度为5～15w/v％，所述步骤b中水溶性炭化二亚胺的浓度为8～12mg/ml。

8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c中的抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I是以融合蛋白Ure-BA为抗原物质，免疫动物制备获得的多克隆抗体，所述融合蛋白Ure-BA序列见SEQ ID NO：5。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c乳胶悬液中羧基化的聚苯乙烯颗粒偶联抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I的量为：0.5mg抗胃幽门螺旋杆菌尿素酶抗体I/10mg聚苯乙烯颗粒。

10.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中致敏乳胶聚酯膜的制备具体步骤为：

A.用乳胶缓冲液稀释致敏乳胶颗粒，获得0.2～0.6w/v％的致敏乳胶溶液；

B.用步骤A制备好的致敏乳胶溶液喷涂聚酯膜，干燥，制得致敏乳胶聚酯膜。

11.如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A中的乳胶缓冲液配方如下：8～12v％ 1.0M Tris液，0.2～0.4w/v％聚乙二醇20000，0.15～0.25w/v％牛血清白蛋白，0.1～0.3w/v％脱脂牛奶，0.25～0.35w/v％酪蛋白，和0.02～0.08w/v％叠氮化钠，用盐酸调节pH至8.0±0.05，余量为水。

12.权利要求1-3任一权利要求所述的试剂盒在制备胃幽门螺旋杆菌检测试剂中的应用。