[发明专利]一种多能干细胞表面标志物及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种多能干细胞表面标志物及其用于分离多能干细胞的方法。

背景技术

多能干细胞包括胚胎干细胞(ESCs，自然胚和重构胚胚胎干细胞等)和诱导性多能干细胞(iPSCs)，是研究分化和发育的良好模型，也是再生医学中进行替代治疗的重要材料。干细胞表面分子，因在干细胞膜表面特异的表达，不需要以破坏细胞为代价，即可准确判断细胞是否是干细胞，从而是分离、纯化自然状态下干细胞的有效标志。

虽然目前已经发现报道了一些多能干细胞的标志物，但在特异性上有所欠缺，即在干细胞和分化细胞上均有表达，这给分离、纯化干细胞带来了困难，也是进一步研究干细胞功能的障碍。因此，寻找、鉴定干细胞特异性的标志物，用于分离纯化真正的干细胞，具有十分重要的意义。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对现有的多能干细胞表面分子不够特异、不能准确分离多能干细胞的问题，提供一种新的多能干细胞表面标志物。本发明也提供用该新于分离多能干细胞表面标志物多能干细胞的方法。

Claudin6(简称Cldn6)是具有跨膜结构的紧密连接蛋白家族中的一个成员，本发明人通过芯片数据分析，筛选出Cldn6为候选干细胞表面标志物。Cldn6在干细胞中高表达且定位在细胞表面，在分化细胞中几乎无表达。应用Cldn6作为标志物，可以将未分化的干细胞从混合细胞畸胎瘤模型中分离出来，证明了Cldn6的干细胞特异性表面标志物作用，从而完成了本发明。

本发明的第一方面提供紧密连接蛋白家族的成员Cldn6作为多能干细胞表面标志物的用途。

本发明中，Cldn6是紧密连接蛋白家族(tight junction family)的成员。小鼠Cldn6蛋白由小鼠Claudin6基因(定位在小鼠17号染色体上，Gene ID：54419)编码，由219个氨基酸组成，是包含4个跨膜结构域的细胞膜分子(参见文献Genome Biol.2009；10(8)：235-241.)。

Cldn6作为多能干细胞表面标志物可以用于分离、纯化或者检测、鉴定多能干细胞。

本发明的第二方面提供紧密连接蛋白家族的成员Cldn6在分离或者检测多能干细胞中的用途。

本发明中，优选的，所述的多能干细胞是胚胎干细胞或者诱导性多能干细胞。所述的胚胎包括自然胚和重构胚等。克隆的重构胚等也可以产生胚胎干细胞，用于重构胚中的胚胎干细胞也在本发明的保护范围之内。

本发明中，优选的，所述的多能干细胞是小鼠多能干细胞。更优选的，所述的小鼠多能干细胞是小鼠胚胎干细胞CGR8.8或者小鼠胚胎干细胞R1。

优选的，Cldn6作为唯一的多能干细胞表面标志物单独使用或者和其它常规的多能干细胞标志物联合使用。优选的，所述的其它多能干细胞标志物是Oct-4、Nanog和/或ALP。

本发明的第三方面提供一种分离或者检测多能干细胞的方法，包括荧光标记细胞分选法、免疫磁分离法或免疫吸附柱分离法，这些方法都采用多能干细胞的表面标志物、其抗体和连接荧光标记、磁性物质或者吸附柱的二抗，来实现多能干细胞的分离或者检测，其中所采用的多能干细胞表面标志物是Cldn6。

利用细胞表面标记物来分离纯化细胞的方法是本领域常规的方法，包括荧光标记细胞分选法、免疫磁分离法或免疫吸附柱分离法等。这些方法都采用多能干细胞的表面标志物的抗体以及连接荧光标记、磁性物质或者吸附柱的二抗，将通过抗体和目标细胞表面的标志物的结合，将目标细胞分离纯化出来。本发明可以采用这些常规的技术，其中所使用的细胞表面标志物是Cldn6。

本发明还提供一种分离或者检测多能干细胞的试剂盒，其包含特异性的测量Cldn6所需的试剂。所述的特异性的测量Cldn6所需的试剂优选包括Cldn6的抗体和/或Cldn6的二抗。也可以进一步包括其他特异性的测量其他干细胞表面标记物(如Oct4或Nanog)所需的试剂。