[发明专利]中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201210081542.7 | 申请日： | 2012-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN102627687A | 公开（公告）日： | 2012-08-08 |
| 发明（设计）人： | 丘高峰;王承志;李真;宋亚楠 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C07K7/23 | 分类号： | C07K7/23;C07K1/16;A01K61/00 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 201306 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 中华 绒螯蟹促 性腺 释放 激素 类似物 及其 制备 方法 应用 | ||
1.中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物，其特征在于，氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。
2.权利要求1所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取中华绒螯蟹的脑组织粗提液，用RP-HPLC法分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；其中流动相A为1wt‰三氟乙酸水溶液；流动相B为1wt‰三氟乙酸乙腈溶液，且0～45分钟内流动相B在流动相中体积含量从5％线性增加至35％；RP-HPLC流量1ml/ml，柱温25℃；
(2)取步骤(1)产物，用RP-HPLC法进行第二次分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；其中流动相A为1wt‰三氟乙酸水溶液；流动相B为1wt‰三氟乙酸乙腈溶液，且0～50分钟内流动相B在流动相中体积含量从1％线性增加至10％；RP-HPLC流量1ml/ml，柱温25℃；
(3)取步骤(2)产物，用RP-HPLC法进行第三次分级分离，采用二元流动相梯度洗脱法洗脱，收集章鱼GnRH免疫反应呈阳性的组分；其中流动相A为1wt‰三氟乙酸水溶液；流动相B为1wt‰三氟乙酸乙腈溶液，且0～50分钟内流动相B在流动相中体积含量从0％线性增加至10％；RP-HPLC流量1ml/ml，柱温25℃。
3.权利要求2所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物的制备方法，其特征在于，所述中华绒螯蟹的脑组织粗提液制备方法包括如下步骤：
取雌性性成熟健康中华绒螯蟹脑组织，加入1wt‰三氟乙酸水溶液0～4℃匀浆，12000～18000rpm离心2015～20min，取上清液。
4.权利要求2所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中收集第17～22min分离组分；步骤(2)中收集第28～29.5min分离组分；步骤(3)中收集第33～35min分离组分。
5.权利要求1所述中华绒螯蟹促性腺释放激素类似物在人工催熟蟹类卵母细胞方面的应用。
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