[发明专利]用于诊断术前卵巢癌盆腔外转移的悬浮芯片检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于诊断术前卵巢癌盆腔外转移的悬浮芯片检测试剂盒，其特征在于主要包括三种偶联羟基荧光微球和三种羊抗人多克隆抗体；所述三种偶联羟基荧光微球分别包被MMP9、Hpa1、CL三种全长cDNA编码蛋白的鼠抗人单克隆抗体；所述三种羊抗人多克隆抗体分别为链亲和霉素-藻红素亲和偶联的MMP9、Hpa、CL羊抗人多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述用于诊断术前卵巢癌盆腔外转移的悬浮芯片检测试剂盒的制备方法，其特征在于：取三种偶联羟基荧光微球分别包被MMP9、Hpa1、CL三种全长cDNA编码蛋白的鼠抗人单克隆抗体；将链亲和霉素-藻红素与MMP9、Hpa、CL羊抗人多克隆抗体进行亲和偶联。

3.根据权利要求2所述用于诊断术前卵巢癌盆腔外转移的悬浮芯片检测试剂盒的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

<1>荧光微球包被鼠抗人单克隆抗体

取三种偶联羟基荧光微球，三种鼠抗人单克隆抗体各对应一种偶联羟基荧光微球；分别将含有1.0×10⁵个微球的8μl三种偶联羟基荧光微球重悬于250μl稀释液中，加入10ul浓度为50mg/ml的EDC后，迅速加入10ul浓度为50mg/ml的S-NHS活化微球，室温避光孵育20min，离心，弃上清；用250ul稀释液重悬微球，分别加入浓度为1ug/mL的所述鼠抗人单克隆抗体250μl，混匀，室温避光孵育30min，离心，弃上清，用稀释液清洗交联好的微球两次，最后定容至终浓度200个微球/μl，室温避光保存，即得分别包被MMP9、Hpa1、CL三种全长cDNA编码蛋白的鼠抗人单克隆抗体的三种偶联羟基荧光微球溶液；

<2>链亲和霉素-藻红素亲和偶联羊抗人多克隆抗体

用稀释液分别配制浓度为4μg/ml的三种羊抗人多克隆抗体溶液，用超纯水配制浓度为10mmol/L的链亲和霉素-藻红素蛋白溶液，将等体积的链亲和霉素-藻红素蛋白溶液加入到羊抗人多克隆抗体溶液中，在冰上震摇2h后，得到浓度为2ug/mL的链亲和霉素-藻红素亲和偶联羊抗人多克隆抗体溶液，分装于-20℃冻存备用。

4.根据权利要求3所述用于诊断术前卵巢癌盆腔外转移的悬浮芯片检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述稀释液为含1％牛血清白蛋pH 7.4的10mM磷酸缓冲液。