[发明专利]五节芒多倍体诱导方法

权利要求书

1.五节芒多倍体诱导方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1)外植体的选择与灭菌：选用五节芒种子，在无菌操作台上用70％酒精处理，再用0.1％的升汞消毒，最后用无菌水冲洗备用；

2)胚性愈伤组织的诱导和分化：将灭菌处理后种子，在超净台接种在愈伤组织诱导培养基：MS+2-5mg/L2，4-D；暗培养，保持温度24±2℃诱导愈伤组织，然后将愈伤组织接种在分化培养基MS+1-2mg/L6-BA中，分化条件为温度24±2℃，光照2000lux；

3)秋水仙素的处理：将秋水仙素过滤灭菌，将分化后带芽点的愈伤组织接种于添加质量百分比为0.05％-0.2％的秋水仙素的基本培养基中，处理24h-72h；

4)丛生芽诱导或增殖：将材料从秋水仙素处理培养基中取出，无菌水清洗，用灭菌过的滤纸吸干残留水分；转入分化增殖生根培养基MS+2mg/L6-BA+0.2mg/LIAA中，使其分化增殖成苗。

2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，

步骤1)中选用五节芒种子，在无菌操作台上用70％酒精处理15-30秒，再用0.1％的升汞消毒10～15分钟，用无菌水冲洗6～7次备用。

3.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，

步骤2)中50ml三角瓶内每瓶接种15-20颗种子。

4.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，

步骤2)中，当愈伤组织长至直径为0.5-0.8cm后进行分化，分化获得带芽点的愈伤组织或丛生芽；选取带芽点的愈伤组织进行秋水仙素的处理。

5.根据权利要求1或4所述的诱导方法，其特征在于，

步骤2)中挑选淡黄色并致密的愈伤组织，接种在分化培养基中。

6.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，

步骤3)中所述的基本培养基为MS+0.3％蔗糖+0.7％琼脂。

7.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，

步骤3)中将分化后带芽点的愈伤组织接种于添加质量百分比为0.1％-0.2％的秋水仙素的基本培养基中，处理24h-72h。

8.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，

步骤4)中将材料从秋水仙素处理培养基中取出，用灭菌过的滤纸吸干残留液后，无菌水清洗3次，每次1-3分钟；清洗后，用灭菌过的滤纸吸干残留水分。