[发明专利]牛奶过敏原检测板及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及双抗原夹心金免疫层析检测技术，具体是一种牛奶过敏原检测板及其制备方法。

背景技术

过敏性疾病是指机体对外界刺激（食物、药物、花粉等）作出错误免疫应答导致各种临床症。免疫应答是抗原活化免疫细胞后产生机体复杂反应过程；引起过敏反应的抗原（蛋白）称之为过敏原。食物过敏性疾病是由于进食某种食物导致过敏性肠胃炎或皮肤症状，有时可导致严重的全身反应-过敏性休克。牛奶是婴幼儿甚至成人的重要营养来源，而对牛奶过敏的患者饮用牛奶会产生肠胃不适症状，影响儿童健康发育。牛奶过敏在食物过敏人群中占有相当大的比例，成人约占2%，儿童约占6%。研究证实，食物过敏患者的临床症状是因患者体内产生的特异性抗体（IgE或IgG）所致；同时也可以通过检测血清中是否存在此种特异性抗体，来帮助临床医生确认过敏性食物。

目前，国内用于过敏原检测的商品化试剂主要为免疫印迹法和酶联免疫法。由于引起过敏反应的抗体主要是IgE类，因此，这些商品化试剂测定的抗体多为IgE类。 

此外，为了在一次检测过程中，能检测到多种过敏原抗体以实现多种过敏原联合筛查，这些商品化试剂盒已经预先在固相材料表面（硝酸纤维膜的不同区域或酶标反应板不同孔）包被多种过敏原。由于过敏性疾病有明显地域性，商品化试剂可针对不同地区特点有不同过敏原组合模式。同时，根据过敏原进入人体途径又分为主要针对空气中过敏原的吸入性过敏原检测试剂盒；以及针对食物中过敏原的食入性过敏原检测试剂盒。

但是，上述商品化试剂盒在进行食入性过敏原筛查时存在一定缺陷或不足，主要表现为以下几个方面：

⑴ 食物过敏存在某些特殊性，临床医生往往根据患者或家属提供的病史作出初步判断，可以锁定一种或几种食物认为是疑似过敏食物。在这种情况下，实验室只需检测疑似食物，而不需检测其它食物。但是，目前商品化试剂盒却不能根据临床医生的提示进行选择，只能按照商品化试剂盒所提供的固定组合方式进行检测。此种测定模式不仅增加患者就医成本，而且，也浪费宝贵医学资源。

⑵ 研究显示食物过敏反应并非均由IgE类抗体导致，部分病例由IgG₄引起；同时，有些个体对食物过敏原应答后可产生IgG类抗体，从而导致食物不耐受。由于现有商品化试剂盒采用间接法模式检测特异性IgE，采用羊（兔）抗人IgE作为标记抗体，此种诊断试剂不能检测到IgG类抗体，容易漏诊，影响临床作出正确诊断。

⑶ 无论是酶联免疫法，还是酶免疫印迹法，由于复杂操作过程和较长反应时间，使整个检测过程一般需要3-4小时。如此长的检测时间，使患者不能在初次就医时拿到检测报告，患者需要择日取报告，再次就医。对于初诊患儿如医生怀疑牛奶过敏，往往需要快速实验室诊断，此时只需快速筛查进行排除或初步确认，而现有商品化试剂盒不能满足临床或患者的这一要求。

发明内容

本发明就是为了解决食入性过敏原筛查过程中，不能根据临床医生的提示进行选择，只能按照商品化试剂盒所提供的固定组合方式进行检测，不能检测到IgG类抗体，容易漏诊，以及酶免疫印迹法，复杂操作过程和较长反应时间等问题，而提供一种快速的牛奶过敏原检测板及其制备方法。

本发明是按以下技术方案实现的。

一种牛奶过敏原检测板的制备方法，包括矩形PVC垫板上两端分别设置吸水材料的待测样本区和吸附区，而在待测样本区和吸附区中间依次设置有胶体金标记抗原，在硝酸纤维素膜上分别包被牛奶中酪蛋白、β乳球蛋白、α乳白蛋白组成牛奶过敏原的检测区和包被抗-β乳球蛋白抗体的质控区，

其中，在经膜处理液浸泡过的硝酸纤维素膜上，将牛奶过敏原和抗-β乳球蛋白抗体6，按照顺序分别点样于规划的检测区和质控区,牛奶过敏原的总蛋白浓度和抗-β乳球蛋白抗体总蛋白浓度均为1.8-2.2毫克/毫升，一次点样，每个点样孔0.2毫升，室温温育2小时；蒸馏水及膜处理液冲洗后，用2%聚乙烯醇溶液室温封闭1小时；弃去封闭液，蒸馏水、膜处理液冲洗，干燥后裁剪置于PVC垫板上；

另将酪蛋白，β乳球蛋白，α乳白蛋白分别标记胶体金，混合制备胶体金标记抗原，并置于PVC垫板上。

所述牛奶过敏原检测板的制备方法，其牛奶过敏原是牛奶中酪蛋白、β乳球蛋白、α乳白蛋白等浓度比例混合后作为已知抗原点样。