[发明专利]一种HPLC波长切换技术同时测定葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂中多种成分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种HPLC波长切换技术同时测定中药及中药制剂中多种成分的方法，特别是涉及一种HPLC同时测定葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂中1-8种成分的含量的方法。

背景技术

同时测定葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂中1-8种成分的含量，是建立葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂质量标准的重要组成部分，为全面评价中药质量提供依据。目前《中国药典》（2010版）仅采用HPLC固定波长法对葛根中葛根素一种含量较大的成分进行了测定。但葛根中有效物质并不是单一的成分，而且每种成分的最大吸收波长是不一样的。通过测定中药的某一个成分含量的高低对该中药进行质量控制，不够全面。

发明内容

本发明的目的是提供一种HPLC波长切换技术同时测定葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂中1-8种成分含量的方法，该方法较其他含量检测方法，如单一成分含量检测、非切换波长检测等方法，可以做到更全面，准确的控制葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂质量的效果。

采用的技术方案是：

一种HPLC波长切换同时测定葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂中1-8种成分含量的方法，包括下述工艺步骤：

1、制备供试品溶液，分别盛装备用，其制备方法如下：取葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂，相当于含葛根药材0.5-1.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加50%-70%乙醇30-50倍量，回流提取2-3次，每次2-3小时，放冷，再称定重量，用50%-70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取5-10ml，置10-25ml量瓶中，加30%-50乙醇至刻度，摇匀，即得。

2、葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂中1-8种成分的含量测定，采用高效液相色谱法，应用波长切换及梯度洗脱技术：取上述制备的一份供试品溶液，上ODS色谱柱（150-250×4.6-6.0mm,2-5μm），梯度洗脱；洗脱液为乙腈与磷酸水混合液:第一梯度洗脱采用乙腈5—9%：磷酸水95—91%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈9—9%：磷酸水91—91%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈9—12%：磷酸水91—88%的混合液，第四梯度洗脱采用乙腈12—13%：磷酸水88—87%的混合液，第五梯度洗脱采用乙腈13—16%：磷酸水87—84%的混合液，第六梯度洗脱采用乙腈16—22%：磷酸水84—78%的混合液，第七梯度洗脱采用乙腈22—22%：磷酸水78—78%的混合液，第八梯度洗脱采用乙腈22—32%：磷酸水78—68%的混合液，第九梯度洗脱采用乙腈32—42%：磷酸水68—58%的混合液，第十梯度洗脱采用乙腈42—60%：磷酸水58—40%的混合液；洗脱液流速为0.8—1ml/min；检测波长：第一时间段为247nm，第二时间段为250nm，第三时间段为259nm,第四时间段为261nm，第五时间段为248nm，第六时间段为261nm，第七时间段为248nm，第八时间段为261nm，可依次测定并计算出样品葛根，升麻、葛根药对及含升麻、葛根药对的制剂中1-8种成分的含量，在上述色谱条件下，理论塔板数以葛根素计不低于25000，分离度＞1.5。

上述百分比为体积百分比。

3、制备对照品储备液，其制备方法如下： 分别精密称取3＇-羟基葛根素、葛根素对照品适量，加30%甲醇分别制成每1ml中含3＇-羟基葛根素、葛根素各0.70-2.0，1.0 -3.0mg的对照品储备液；精密称取大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鹰嘴豆芽素A对照品适量，加甲醇分别制成每1 ml含大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鹰嘴豆芽素A各0.61-2.1、0.30-1.2、0.78-1.6、0.17-0.35、0.17-0.36、0.015 -0.038mg的对照品储备液。

4、方法学考察：

线性范围的考察  精密吸取1-8种混合对照品储备液适量，置量瓶中，加甲醇稀释至各对照品浓度均在0.002-10mg/ml范围内，摇匀，制得混合对照品溶液。分别精密吸取混合对照品溶液适量，在上述色谱条件下分别进样进行测定。以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。

精密度考察  精密吸取供试品溶液10 μl，连续进样5次，测得3＇-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、芒柄花素、鹰嘴豆芽素A等1-8种成分峰面积的RSD均应小于3%。