[发明专利]水稻种胚特异表达的基因OsESG1、克隆方法及应用

权利要求书

1.一种水稻种胚中特异表达的基因，它是具有SEQ ID NO.1中所示核苷酸序列的片段。

2.一种含有权利要求1的基因的表达载体。

3.一种含有权利要求1的基因的正义表达载体pCambia1301P::OsESG1，其特征是，它是将基因OsESG1以5’到3’方向构建入表达载体pCambia1301P；所述pCambia1301P的获取方法为：以载体pCambia1301为骨架，经EcoR I、KpnI双酶切后，与经EcoR I、KpnI双酶切的CaMV 35S启动子片段连接。

4.一种含有权利要求1的基因的反义表达载体pCambia1301P::AOsESG1，其特征是，它是将基因OsESG1以3’到5’方向构建入表达载体pCambia1301P；所述pCambia1301P的获取方法为：以载体pCambia1301为骨架，经EcoR I、KpnI双酶切后，与经EcoR I、KpnI双酶切的CaMV 35S启动子片段连接。

5.一种转基因植株的获取方法，其特征是，将权利要求4的反义表达载体pCambia1301P::AOsESG1农杆菌介导水稻遗传转化，获得转基因植株。

6.权利要求1所述的基因的克隆方法，其特征是，以水稻基因组DNA为模板，以通过基因序列设计的带有酶切位点KpnI、BamH I的序列为引物，经过PCR获得。

7.如权利要求6所述的基因的克隆方法，其特征是，所述引物序列为：

OsESG1-F：5’-GGGGTACCGCAATGATACTCAACGTGATC-3’；

OsESG1-R：5’-CGGGATCCAACTTCCACGGAATATATATCAC-3’；

PCR反应体系：含有Mg²⁺的Taq酶缓冲液5μl，2.5mM的dNTP3μl，10μM的OsESG1-F引物1μl、10μM的OsESG1-R引物1μl，水稻DNA 4μl，Taq酶0.5μl，加灭菌双蒸水至50μl；

PCR反应程序：98℃10min，94℃1min，56℃30s，72℃2.5min，35个循环，72℃10min。

8.权利要求1所述的基因在调控种子根部发育方面的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征是，通过参与胚中细胞分裂过程，通过影响细胞的体积及大小调控种子根部发育。