[发明专利]一种鉴别粳稻BT型细胞质雄性不育恢复基因Rf1a的分子标记方法

权利要求书

1.一种鉴定粳稻BT型细胞质雄性不育恢复基因Rf1a的分子标记方法，其特征在于：

用Rf1a恢复基因特异性引物InDel-Rf1a

正向引物InDel-Rf1a-F序列为 5'-CTGATGATCGAGGAGGAGGTA-3'

反向引物InDel-Rf1a-R序列为 5'- TAACGCGTCTTCCATCCTACT-3'

扩增水稻植株的基因组DNA，如果有1,145 bp的特征条带即为含Rf1a恢复基因的纯合体；如果有571 bp的特征条带即为不含Rf1a恢复基因的纯合体；如果同时存在1,145 bp和571 bp的两条特征条带，则为Rf1a恢复基因的杂合体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

水稻植株基因组DNA的提取；

将权利要求1所述的两条分子标记引物InDel-Rf1a-F和InDel-Rf1a-R加入PCR反应体系，并对水稻种质资源或育种群体植株的DNA进行扩增；20 μL PCR反应体系包括：10 ng/μL的 DNA 2.0 μL，4 pmol/ μL的引物2.0 μL ，其中引物InDel-Rf1a-F和InDel-Rf1a-R各1.0 μL，10×PCR 含有25 mmol/L MgCl₂ 的Buffer 2.0 μL，2.5 mmol/L的dNTP 0.4 μL，5 U/μL 的Taq 0.5 μL和ddH₂O 13.1 μL；

PCR反应程序包括：95 ℃预变性5 min；然后95℃变性30 s、55℃复性30 s、72℃延伸1 min，循环35次；然后72℃延伸7 min，10℃冷却10 min后，将扩增产物加上样缓冲液终止反应；

反应产物在质量比浓度为1.0%的琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察，记载。