[发明专利]4种抗感冒中药总黄酮的制备方法及其在制药中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及抗感冒中药领域，具体指4种抗感冒中药总黄酮的制备方法及其在制药中的应用。

背景技术：

感冒，是由多种病毒引起的一种呼吸道常见病，引起感冒的病毒有鼻病毒、冠状病毒、流感病毒、副流感病毒、RS病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒、呼吸道合胞病毒等9种，其中以冠状病毒和鼻病毒为主要致病病毒。临床表现以鼻塞、咳嗽、头痛、恶寒发热、全身不适为其特征。全年均可发病，尤以春季多见。用于治疗感冒的药物有许多种，由于中药具有副作用小，疗效好的特点而受到人们的青睐。

金莲花属(TrolliusL.)植物隶属于毛茛科金莲花亚科，为多年生草本植物，高约40-100cm，常生长在湿草地。中国植物志(1979年)记载我国共有金莲花属植物23种，其中包括16个种和7个变种，常作药用的品种有金莲花T.chinensis Bunge、短瓣金莲花T.ledebouri Reichb、长瓣金莲花T.macropetalus Fr.Schmidt、矮金莲花T.farreri Staph及阿尔泰金莲花T.altaicus C.A.Mey等，分布于我国东北、内蒙、河北、山西、四川、新疆等省区。金莲花属植物药用始载于清代，赵学敏所著《本草纲目拾遗》中谓其“味苦、性寒、无毒，可治口症、喉肿、牙宣、耳痛、明目、解岚瘴”，民间主要作为清热解毒药。现代药理活性表明金莲花主要具有抗菌、抗病毒、抗氧化等活性。

金莲花属植物为治疗感冒复方的常用中药品种之一，目前市面上已销售的包含金莲花的中药复方有金莲花片、金莲花胶囊、金莲花口服液、金莲清热胶囊、双金连合剂等。

本发明的目的和意义在于：本发明中抗感冒总黄酮是从金莲花属植物中提取纯化得到，制备工艺简单，可用于抗感冒药物的开发。

发明内容：

本发明提供不同来源金莲花属植物抗感冒总黄酮的制备方法及其在制药中的应用。

本发明的抗感冒总黄酮制备方法包含以下步骤：

(1)提取

取本发明中药材，分别粉碎，过筛，加入10～20倍的水或/和醇提取、过滤，过滤后滤渣再加入10～20倍的水或/和醇提取1～3次，过滤后合并滤液，减压浓缩，得到4种中药提取物。

所述中药材为4种不同来源的金莲花属植物即短瓣金莲花(Trollius ledebouri)、长白金莲花(Trollius japonicus)、矮金莲花(Trollius farreri)及阿尔泰金莲花(Trollius altaicus)。

所采用的提取方式包括超声、回流、煎煮、索氏提取、冷浸。

(2)纯化

分别将浓缩后液体过滤后上色谱柱，洗脱剂洗脱，收集洗脱液，干燥即得4种中药总黄酮。

所述色谱柱填料为聚酰胺、大孔吸附树脂、硅胶、氧化铝、ODS。

所述洗脱剂为甲醇、乙醇、丙酮或50-95v％的乙醇、甲醇或丙酮的水溶液。

具体实施方式：

下面结合实施案例对本发明做进一步的详细描述。

实施例1本发明中抗感冒总黄酮的制备

短瓣金莲花干燥花粉碎后过50目筛，称取适量置于锥形瓶中，加入约20倍量70％乙醇超声两次，每次超声30min，合并滤液后浓缩至无醇味，冷冻干燥。称取适量干燥提取物，加水使之完全溶解，过聚酰胺(60-100目)柱，蒸馏水充分洗脱除去聚酰胺未吸附杂质后，用70％乙醇洗脱，洗脱液浓缩后即得短瓣金莲花总黄酮。

实施例2本发明总黄酮的抗病毒活性研究

待测总黄酮样品为4种不同来源的金莲花属植物即短瓣金莲花(Trollius ledebouri)、长白金莲花(Trollius japonicus)、矮金莲花(Trollius farreri)及阿尔泰金莲花(Trollius altaicus)的总黄酮提取物。

以Vero(非洲绿猴肾)细胞为病毒宿主，测定样品抑制柯萨奇B3型病毒引起Vero细胞病变程度。Vero细胞种96孔培养板，24小时后感染柯萨奇B3型病毒，吸附2小时，弃病毒液。总黄酮样品用DMSO配成母液，用培养液稀释成一定浓度后再作3倍稀释，共8个稀释度。按以上稀释度加入样品及阳性对照药，同时设细胞对照孔和病毒对照孔，待病毒对照组病变程度(CPE)达4+时观察各组细胞病变程度(CPE)，用Reed-Muench法分别计算样品对柯萨奇B3型病毒的半数抑制浓度(IC50)。

实验结果表明，不同来源金莲花属药用植物总黄酮均能对柯萨奇病毒产生不同程度的抑制作用，具体结果见表1.