[发明专利]鉴别鸡毒支原体强弱毒株的多重荧光PCR检测试剂盒

权利要求书

1.检测鸡毒支原体的多重荧光PCR的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；

所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列4和序列5。

2.检测鸡毒支原体的多重荧光PCR的试剂A，由权利要求1所述的引物组、探针A和探针B组成；

所述探针A的核苷酸序列为序列表中的序列3，且所述探针A的5’端标记有报告荧光染料A，3’端标记有淬灭荧光染料；

所述探针B的核苷酸序列为序列表中的序列6，且所述探针B的5’端标记有报告荧光染料B，3’端标记有淬灭荧光染料。

3.根据权利要求2所述的试剂A，其特征在于：

所述报告荧光染料A为ROX，

所述报告荧光染料B为FAM；

所述淬灭荧光染料为Eclipse；

所述试剂A中所述引物1、所述引物2、所述探针A、所述引物3、所述引物4和所述探针B的摩尔比为1-3∶1-3∶1-3∶1-3∶1-3∶1-3，所述引物1、所述引物2、所述探针A、所述引物3、所述引物4和所述探针B的摩尔比具体为1∶1∶1∶2∶2∶2。

4.检测鸡毒支原体的多重荧光PCR试剂B，由权利要求2或3所述的试剂A、多重荧光PCR缓冲液、MgCl₂、dNTP、DNA聚合酶和水组成；

所述引物1、所述引物2、所述探针A、所述引物3、所述引物4和所述探针B在所述扩增试剂B中的终浓度均具体为0.2uM-0.8uM。

所述引物1在所述PCR试剂B中的终浓度进一步具体为0.2uM；

所述引物2在所述PCR试剂B中的终浓度进一步具体为0.2uM；

所述探针A在所述PCR试剂B中的终浓度进一步具体为0.2uM；

所述引物3在所述PCR试剂B中的终浓度进一步具体为0.4uM；

所述引物4在所述PCR试剂B中的终浓度进一步具体为0.4uM；

所述探针B在所述PCR试剂B中的终浓度进一步具体为0.4uM。

5.检测鸡毒支原体的多重荧光PCR试剂盒，包括权利要求1所述的引物组或权利要求2或3所述的试剂A或权利要求4所述PCR试剂B。

6.权利要求1所述的引物组或权利要求2或3所述的试剂A或权利要求4所述PCR试剂B或权利要求5所述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸡毒支原体产品中的应用。

7.权利要求1所述的引物组或权利要求2或3所述的试剂A或权利要求4所述PCR试剂B或权利要求5所述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸡毒支原体强毒株或鸡毒支原体弱毒株产品中的应用。

8.根据权利要求6或7所述应用，其特征在于：所述检测和/或辅助检测为用权利要求1所述的引物组或权利要求2或3所述的试剂A或权利要求4所述PCR试剂B或权利要求5所述试剂盒对所述待测样品进行多重荧光PCR反应。