[发明专利]一种胰岛素的制备方法有效
| 申请号： | 201210074163.5 | 申请日： | 2012-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN102628072A | 公开（公告）日： | 2012-08-08 |
| 发明（设计）人： | 王大梅;李学勇 | 申请（专利权）人： | 甘李药业有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K14/62;C07K1/18 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 101102 北京市通州区中关村*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胰岛素 制备 方法 | ||
1.一种胰岛素的制备方法，包括以下步骤：
（1）获得正确构象的胰岛素原或胰岛素前体；
（2）使用胰蛋白酶酶切步骤1的胰岛素原或胰岛素前体；
（3）纯化步骤2的酶切产物；
（4）使用羧肽酶B酶切步骤3的纯化产物；
（5）使用阳离子交换层析纯化步骤4的酶切产物；
其中所述胰岛素为A、B链羧端氨基酸选自非碱性氨基酸的人胰岛素或胰岛素类似物或胰岛素衍生物。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其中胰岛素选自人胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素或赖谷胰岛素。
3. 根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤3中的纯化步骤选自阳离子交换层析、阴离子交换层析、疏水层析、排阻层析、HPLC之一或其组合。
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其中步骤3中的纯化步骤包含阳离子交换层析纯化，并且层析介质与步骤5中的阳离子交换层析介质相同。
5. 根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤5中阳离子交换层析的介质选自CM Sepharose?或SP Sepharose?。
6. 根据权利要求1-5中任一所述的制备方法，其还进一步包括在步骤5后使用HPLC进行精纯的步骤。
7. 一种胰岛素的制备方法，包括以下步骤：
（1）获得正确构象的胰岛素原或胰岛素前体；
（2）使用胰蛋白酶酶切步骤1的胰岛素原或胰岛素前体；
（3）使用CM Sepharose? 纯化步骤2的酶切产物；
（4）使用羧肽酶B酶切步骤3的纯化产物；
（5）再次使用CM Sepharose?层析纯化步骤4的酶切产物；
（6）使用HPLC精纯步骤5的酶切产物；
其中所述胰岛素为A、B链羧端氨基酸选自非碱性氨基酸的人胰岛素或胰岛素类似物或胰岛素衍生物。
8. 一种胰岛素的制备方法，包括以下步骤：
（1）获得正确构象的胰岛素原或胰岛素前体；
（2）使用胰蛋白酶酶切步骤1的胰岛素原或胰岛素前体；
（3）使用CM Sepharose?和DEAE Sepharose?纯化步骤2的酶切产物；
（4）使用羧肽酶B酶切步骤3的纯化产物；
（5）再次使用CM Sepharose?层析纯化步骤4的酶切产物；
（6）使用HPLC精纯步骤5的酶切产物；
其中所述胰岛素为A、B链羧端氨基酸选自非碱性氨基酸的人胰岛素或胰岛素类似物或胰岛素衍生物。
9. 一种胰岛素的制备方法，包括以下步骤：
（1）获得正确构象的胰岛素原或胰岛素前体；
（2）使用胰蛋白酶酶切步骤1的胰岛素原或胰岛素前体；
（3）使用Q Sepharose?和SP Sepharose?纯化步骤2的酶切产物；
（4）使用羧肽酶B酶切步骤3的纯化产物；
（5）再次使用SP Sepharose?层析纯化步骤4的酶切产物；
（6）使用HPLC精纯步骤5的酶切产物；
其中所述胰岛素为A、B链羧端氨基酸选自非碱性氨基酸的人胰岛素或胰岛素类似物或胰岛素衍生物。
10. 根据权利要求7-9中任一项所述的制备方法，其中胰岛素选自人胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素或赖谷胰岛素。
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