[发明专利]一种辅助鉴定大豆对大豆花叶病毒抗性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定大豆对大豆花叶病毒抗性的方法。

背景技术

大豆(Glycine max)原产于中国，是重要的经济作物。大豆花叶病毒(soybean mosaic virus，SMV)引起的病害是危害大豆生产的主要病害之一，严重影响大豆产量和品质。培育抗病品种是目前控制SMV流行最有效方法。东北大豆产区SMV的优势毒株为N1株系和N3株系。利用分子标记技术定位与N1株系抗性和N3株系抗性相关基因和紧密连锁的分子标记有益于分子辅助选择抗性大豆品种的育种实践。

刘丽君等(2002)利用黑农39×合丰25的F2群体，筛选出共显性RAPD标记OPN1400/1300，与黑农39抗病基因的遗传距离为8.2cM。理论上，与抗病基因的遗传距离小于5cM的分子标记才具有分子辅助选择的应用价值，以往的研究结果所得到的标记-基因遗传距离较远，应用范围较小。因此，缩小抗病位点的遗传距离，寻找与抗病位点紧密连锁的分子标记对于提高分子辅助选择的效力具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定大豆对大豆花叶病毒抗性的方法。

本发明保护序列表的序列1所示DNA片段和序列表的序列2所示DNA片段组成的引物对甲。

本发明还保护引物组合物，包括所述引物对甲。

所述引物组合物(引物组合物I)还可包括引物对乙；所述引物对乙由序列表的序列3所示DNA片段和序列表的序列4所示DNA片段组成。所述引物组合物具体可由所述引物对甲和所述引物对乙组成。

所述引物组合物(引物组合物II)还包括引物对丙；所述引物对丙由序列表的序列5所示DNA片段和序列表的序列6所示DNA片段组成。所述引物组合物具体可由所述引物对甲和所述引物对丙组成。

所述引物组合物(引物组合物III)还可包括所述引物对乙和所述引物对丙。所述引物组合物具体可由所述引物对甲、所述引物对乙和所述引物对丙组成。

所述引物对甲可用于如下(a)或(b)：

(a)辅助鉴定大豆对大豆花叶病毒的抗性；

(b)辅助筛选抗大豆花叶病毒的大豆。

所述应用具体可采用如下方法：以待测大豆的基因组DNA为模板，用所述引物对甲进行PCR扩增；将PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并银染显色，如果待测大豆在100bp在250bp之间具有与抗病大豆一致的带型(显示一条约150bp的特异条带)、待测大豆为候选的抗大豆花叶病毒大豆，如果待测大豆在100bp在250bp之间具有与感病大豆一致的带型(即显示一条约170bp的特异条带)，待测为候选的感大豆花叶病毒大豆。

所述抗病大豆具体可为东农93-046。所述感病大豆具体可为conrad。所述大豆花叶病毒为SMV-N1株系或SMV-N3株系。

所述引物组合物I可用于如下(c)或(d)：

(c)辅助鉴定大豆对大豆花叶病毒的抗性；

(d)辅助筛选抗大豆花叶病毒的大豆。

所述应用具体可采用如下方法(方法甲)：以待测大豆的基因组DNA为模板，用所述引物对甲进行PCR扩增；将PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并银染显色，如果待测大豆在100bp在250bp之间具有与抗病大豆一致的带型(显示一条约150bp的特异条带)、待测大豆为候选的抗大豆花叶病毒大豆，如果待测大豆在100bp在250bp之间具有与感病大豆一致的带型(即显示一条约170bp的特异条带)，待测大豆为候选的感大豆花叶病毒大豆。

所述应用还可包括如下方法(方法乙)：以待测大豆的基因组DNA为模板，用所述引物对乙进行PCR扩增，采用Lightscanner HRM高分辨率熔解曲线突变检测/基因分型分析系统(Idaho公司)对PCR扩增产物进行分析，如果显示与抗病大豆一致的扩增曲线、待测大豆为候选的抗大豆花叶病毒大豆，如果显示与感病大豆一致的扩增曲线，待测大豆为候选的感大豆花叶病毒大豆。

方法乙可作为对方法甲的进一步验证。

所述抗病大豆具体可为东农93-046。所述感病大豆具体可为conrad。所述大豆花叶病毒为SMV-N1株系。

所述引物组合物II可用于如下(e)或(f)：

(e)辅助鉴定大豆对大豆花叶病毒的抗性；

(f)辅助筛选抗大豆花叶病毒的大豆。