[发明专利]一种静注人免疫球蛋白的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。

背景技术

静注人免疫球蛋白的活性成份为蛋白质，其中95%以上为免疫球蛋白。由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法或辛酸沉淀法分离纯化，去除抗补体活性并经病毒灭活处理制成。通常生产方法为低温乙醇离心（压滤）法和辛酸沉淀法，产品得率低，稳定性不好。

现有的低温乙醇法静注人免疫球蛋白工艺采用低温乙醇处理组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，该工艺在制备过程通过对乙醇浓度、pH值等参数控制分离出组分Ⅲ沉淀，再进行一步层析工艺。该方法在分离出组分Ⅲ沉淀过程中使静注人免疫球蛋白析出到Ⅲ沉淀中的量较大，产品得率只能够达到每升血浆5.5克左右，纯度只能够达到96%以上。

现有的辛酸沉淀法静注人免疫球蛋白工艺利用辛酸能够沉淀大部分非免疫球类蛋白，从而达到去除杂蛋白的目的。但该方法对去除凝血因子类物质效果不是佷明显，使产品纯度受到一定的影响。产品得率只能够达到每升血浆6.3克左右，纯度只能够达到98%以上。

为了使静注人免疫球蛋白的产品得率及纯度进一步提高，开发出一种产品生物活性、产品得率和产品纯度更高的静注人免疫球蛋白的制备工艺显得十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用辛酸与氯化钙沉淀法处理组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，再进行两步层析工艺，产品得率可达每升血浆7克以上，产品纯度达到99.5%以上的静注人免疫球蛋白的制备工艺。

本发明的技术方案：

它采用辛酸及氯化钙沉淀法去除杂蛋白及凝血因子类物质，再进行两步层析工艺，其制备工艺如下：

(1)、将检疫期检疫合格的人血浆经离心，离心时，离心速度不大于4L/min/台，出液温度控制在0～4℃；分离冷沉淀，冷沉淀用于Ⅷ因子生产，将离心上清蛋白液输送至蛋白分离反应罐，使蛋白液的温度控制在1～3℃之间，按不超过1.0L/min的流速加入pH 4.0醋酸缓冲液调节蛋白液pH值为6.80～7.00；加－15℃或更冷的95％乙醇，流速不超过1.5L/min，使乙醇体积比终浓度至8％，温度控制在－1～－3℃，加完乙醇后pH值为6.80～7.20；

(2)、将步骤(1)的制得物搅拌30min以上，进行离心，离心过程中出液流速不超过4L/min/台，出液温度控制在－1～－3℃，离心得组分I沉淀和组分Ⅰ上清蛋白液；组分I沉淀存放于冷库或直接用于纤维蛋白原生产；

(3)、将步骤(2)的制得物组分I上清蛋白液加入pH 4.0醋酸缓冲液调节pH值为6.60～6.65；加－15℃或更冷的95％乙醇至乙醇体积比浓度为22％，温度控制在－4～－6℃；搅拌120min以上后，静置60min以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18±0.5g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液，组分Ⅱ+Ⅲ上清液用于人血白蛋白生产；

(4)、将步骤(3)的制得物组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，加入8±2℃的10～12倍量的注射用水溶解，再向溶解液中加入氯化钙,使溶解液钙离子浓度为0.2±0.01mol/L；加完搅拌30±5min；然后在搅拌过程中缓慢加入pH4.0醋酸缓冲液到反应液中，调整pH为4.5±0.2，缓慢加入辛酸，按每升溶解液中加入浓度为98.5%辛酸40±1毫升，加完搅拌60±5min后进行压缩过滤，过滤压力不超过0.2 Mpa，收集压滤液；

 (5)、再进行两步层析工艺，两步层析工艺为：

①对步骤(4)的制得物压滤液进行超滤，将蛋白含量浓缩至5%以上，用5±0.5倍体积2～8℃注射用水进行透析；将蛋白浓度调整至3%～6%，用pH4.0醋酸缓冲液调pH至4.0～4.5，然后加磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.21 s / m～0.25s / m，所述的磷酸－NaOH缓冲液中磷酸与NaOH均为1mol/L，调节好后用Macrocap-Q离子交换柱进行上柱层析纯化，收集第一步流穿液；

②将收集第一步流穿液再进行超滤，将蛋白含量浓缩至5%以上，用5±0.5倍体积2～8℃注射用水进行透析；将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5±0.1mol/L的NaOH调pH至6.8～7.0，然后加所述的磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.15 s / m～0.17s / m ，调节好后用DEAE-FF离子交换柱进行上柱层析纯化，收集第二步流穿液；