[发明专利]一种脱氧河鲀毒素的提取方法

权利要求书

1.一种脱氧河鲀毒素的提取方法，其特征包括以下步骤：

一、制备河鲀毒素母液

先将粗品河鲀毒素置于玻璃烧杯中，加浓度为7％-15％的醋酸溶解，得到“A”溶液，在“A”溶液中加入剂量为“A”溶液量1-10倍的无水乙醇，搅拌均匀，溶解后得到“B”溶液，将“B”溶液通过离心机分离，除去其中的不溶物，得到河鲀毒素上清液；将河鲀毒素上清液倒入烧杯后，移到密闭容器中，然后在密闭容器内放置一杯乙醚溶液，将密闭容器内的温度控制在10℃-35℃；当乙醚向河鲀毒素-醋酸-乙醇-水溶液扩散后，经过10-60小时的反应，即可析出河鲀毒素结晶，得到母液“C”；

二、高效液相色谱分离

将母液“C”真空加热浓缩后，加入氨水将母液“C”pH值调节至7.5-10后，析出沉淀物，将此沉淀物通过水洗、真空冷冻干燥处理后，即可获得白色的含脱氧河鲀毒素沉淀物；将此白色的含脱氧河鲀毒素沉淀物加入浓度为20％-30％的醋酸或磷酸溶解，得到“D”溶液；使用高效制备液相色谱仪对“D”溶液进行液相色谱分离，色谱条件：C₁₈反相柱；流动相为含有1mmol/L-15mmol/L离子对试剂的0.05mol/L-0.5mol/L缓冲液和0.5％-5％甲醇，其流动相的流速为6mL/min-15mL/min；使用示差折光检测器或紫外检测器进行检测；在高效液相色谱分离过程中，按出峰图谱可收集到脱氧河鲀毒素的馏分；

三、层析脱盐处理

将上述脱氧河鲀毒素馏分，缓慢加入装有生物凝胶或酸性阳离子树脂的层析柱中，再用浓度为3％-20％的醋酸溶液进行洗脱，收集pH值为4-7的馏分；然后使用氨水将此馏分的pH值调节至7.5-10，即可析出白色固体；将白色固体经过水洗和真空冷冻干燥处理后，即可得到纯度较高的脱氧河鲀毒素结晶。

2.根据权利要求1所述的一种脱氧河鲀毒素的提取方法，其特征在于：所述的第二步骤中的离子对试剂，主要包括：辛烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、己烷磺酸钠和戊烷磺酸钠。

3.根据权利要求1所述的一种脱氧河鲀毒素的提取方法，其特征在于：所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。