[发明专利]一种复合酶-热水浸提黄柏生物碱的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药制药或原料加工领域，具体涉及一种复合酶法提取黄柏生物碱的方法。

背景技术

黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.的干燥树皮及芸香科植物黄薜Phellodendron amurense Rupr.的树皮。是一种用途广,用量大的中药材。黄柏临床用于湿热泻痢、黄疸、带下、热淋、脚气、痿躄、骨蒸劳热、盗汗、遗精、疮疡肿毒、湿疹瘙痒。药理研究表明，黄柏具有调整心律、降血压、抗消化道溃疡、增强免疫系统和抗病原微生物等作用。黄柏含小檗碱(berberine)、木兰花碱(magnoflorine)、黄柏碱(phellodendrine)、掌叶防己碱(palmatine)，药根碱（Jatrorrhizine）等多种生物碱及内酯、甾醇、粘液质等。黄柏生物碱作为黄柏的主要有效成分，对其应用研究越来越广泛。

目前，黄柏生物碱的提取方法主要有酸水法、石灰乳法、乙醇法、超声波提取等，生物碱为黄柏主要有效成分, 如小檗碱、黄柏碱、木兰花碱、掌叶防己碱、药根碱等，均为季铵生物碱，虽都为水溶性生物碱，采用热水提法，由于黄柏皮性质坚韧，溶剂无法穿透进入纤维素内部，制剂中提取含量不高；另一方面，黄柏粘液含量7%～8%，粘液通常为具有分支结构的杂多糖, 与纤维素等同属多糖类，黄柏提取物中含粘液质制成的中药胶囊，崩解时限不合格, 现有技术采用石灰乳祛除黏液质, 但过滤的时间长，生物碱得率较低，而采用酸碱浸提、半仿生提取等可能会破坏其活性结构。

考虑黄柏中生物碱的状态和性质,特别是几种生物碱分解点都特别低，随着温度增加，小檗碱转化为小檗红碱等特性，我们认为酶处理可提高药效成分提取率，有助于保持天然产物构象，保持成分原有性质，也是仿生化提取中药有效成分的一种方式，克服传统高温煎煮对活性成分的影响，提取温度接近人体温度，水解条件温和，操作简便易行，设备简单。用复合酶澄清提取黄柏，符合中医药理论，故我们采用复合酶-热水浸提黄柏生物碱。

发明内容

本发明主要目的是提供一种简单易行，提取分离速度快，成本低，效率高，适于大规模生产的黄柏生物碱有效部位提取工艺。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种复合酶-热水浸提黄柏生物碱的方法，所述方法是将黄柏药材用复合酶酶解，具体步骤如下：

（1）将检验合格的黄柏原生药饮片粉碎成粗粉，备用；

（2）称取处方量黄柏粗粉，加15倍重量的水浸润，调温度30℃～40℃, pH为3.9～4.5；

（3）另取复合酶加水10倍重量调匀，缓缓加入黄柏水浸液中，搅匀，保温160～200min, 过滤，滤液备用；所述复合酶为每g黄柏取相当于酶活力0.8～1万U的纤维素酶、1.5～2.5万U的果胶酶, 和 0.3～0.5万U的半纤维素酶的混合物；

（4）将黄柏药渣继续加10倍重量的水，煎煮1h，过滤；

（5）将步骤（3）和（4）的滤液合并，灭酶，浓缩至规定量（相当于生药1g/ml），即得黄柏生物碱提取物。

如上所述的方法，其中，所述的复合酶为纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶混合物，所述复合酶较优的可以由以下组料组成：每g黄柏取相当于酶活力0.8～1万U的纤维素酶,  1.5～2.5万U的果胶酶, 0.3～0.5万U的半纤维素酶。

如上所述的方法，其中，所述复合酶的酶活测定方法：纤维素酶在35℃、pH4条件下, 1ｈ分解羧甲基纤维素钠生成1ｍｇ还原糖（以葡萄糖计）所需的酶量为一个纤维素酶活力单位，即1U；果胶酶在35℃、pH4条件下, 1ｈ分解果胶生成1ｍｇ半乳糖醛酸的酶量为一个果胶酶活力单位，即1U；半纤维素酶在35℃pH4条件下, 1h分解木聚糖产生1mg还原糖(以木糖计)的酶量定义为一个半纤维素酶活力单位，即1U。

如上所述的方法，其中，pH值以0.5%稀硫酸、5%Ca(OH)₂水溶液调节。

可见，本方法包括酶促浸提和灭酶浓缩两个阶段。第一阶段主要作用是酶解细胞表面纤维、半纤维木质结构及粘液物,热水浸提利于生物碱的分离、溶出；第二阶段通过加热，既具有灭酶活的作用，同时又浓缩药材至规定量。